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11 高效液相色谱法 (续) 表11. 液相色谱常用检测器的一般性质 紫外-可见光吸收检测器和光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列光谱检测器 荧光检测器和化学发光检测器 蒸发光散射质量检测器(Evaporative Light-Scatting Mass Detector, ELSD) 1）? 工作原理 Step 1: Nebulization ? Column effluent passes through nebulizer needle ? Mixes with nitrogen gas ? Forms dispersion of droplets Step 2: Mobile Phase Evaporation? Droplets pass through a heated zone ? Mobile phase evaporates from the sample particle? Dried sample particles remain Step 3: Detection? Sample particles pass through an optical cell? Sample particles interrupt laser beam and  scatter light? Photodiode detects the scattered light  高效液相色谱的主要分离方法 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱 亲合色谱 正相色谱（Normal Phase Chromatography） 液固吸附色谱 二、流动相的选择 三、样品分子结构对保留的影响 四、应用举例 10.6 反相键合相色谱 一、原理和分离对象 二、流动相的选择 三、反相色谱的保留机理 （1）疏溶剂理论 自学 “疏水效应和液相色谱中的计量置换保留机理”讨论题 S E E 吸附色谱保留值的图解表示 取代苯样品在吸附点A上的定位 吸附剂表面被认为是均匀的，被吸附的分子是平躺在表面上的，所以每个吸附分子所需要的吸附面积可以从它的分子尺寸计算出来。因为溶质和溶剂分子的体积不一样, 一般说来前者大于后者, 因此溶质分子(E)与溶剂分子(S)在吸附剂表面上进行竞争吸附的吸附平衡过程为： EM＋nSS ? ES＋nSM n = AS / AM AE ：组分分子吸附在固定相表面上所需的吸附剂面积; AM：流动相分子吸附所需的吸附剂面积； n：每吸附一个溶质分子需要顶替下来的溶剂分子数。 吸附过程的净吸附自由能： ?G = ?GE,S ＋ n?GS,M －?GE,M －n?GS,S 右端的四个?G 分别表示溶质和溶剂在固定相和流动相的无量纲摩尔自由能。 在大多数吸附系统中, 流动相的自由能项 ?GS,M和?GE,M 远小于吸附相的自由能项?GS,S和?GE,S 。若不考虑流动相的影响, 则 ?G = ?GE,S － n?GS,S = S?－AE?? 容量因子k’ 与单位重量吸附剂上被单分子层溶剂覆盖时的吸附体积VS(系吸附剂比表面积的函数)和 ?G之间有如下关系 ln k’ = lg VS＋?? ?G ??为吸附剂的活性系数, 取决于吸附剂的化学性质和水的覆盖量。??不随实验条件变化而变化。所以, ln k’ = lg VS＋S?－AE?? 这说明液固吸附色谱中溶质的保留值与吸附剂的表面积, 溶质的吸附能和溶剂强度(按定义, 单位活性吸附剂表面上溶剂的吸附能??, 即溶剂强度)等有关。 考虑到溶质和溶剂间的相互作用, Snyder后来又在上式中加入一个二级溶剂效应修正项?, 以弥补忽略溶剂效应之不足。 在硅胶吸附色谱中, 对相对保留值和分离选择性起主导作用的是溶质与固定相的作用, 流动相主要是调节溶质的保留值在适当范围内, 对选择性的影响一般较小。 液固吸附色谱的流动相??值要适当，常用正己烷、正庚烷为主, 添加少量CH2Cl2、CHCl3、CH3CN和CH3OH。 值得注意的是，有机溶剂中的少量水对分离的影响。 样品分子的结构决定它们在色谱柱上保留。而对于吸附色谱来说, 主要取决于样品分子所含的官能团的类型及其数目。一些常见官能团的吸附强度大致如下： ● 不吸附：烷烃 ● 弱吸附：烯烃、硫醇、硫醚、单环或双环芳烃、卤代芳烃 ●中等吸附：多环芳烃、醚、腈、硝基物、大多数羰基化合物