生物显微技术课件（07－08－2）.pptVIP

生物显微技术与电镜技术 海 洋 生 物 系 王 庆 恒 第一篇 生物显微制片技术 第二篇 显微镜与显微摄影 第三篇 电子显微镜 第一篇 生物显微制片技术 第一章 概论 第二章 生物显微制片的步骤和原理 第三章 其他切片法 第一章 概论 第一节 制片的目的与任务 第二节 生物制片的分类 临时制片 按保存时间 永久制片 活体观察法 按制作方法 非切片法 切片法 非切片法 整体封藏法：昆虫口器、浮游动物 涂片法：血液、粪便 伸展法：皮下结缔组织、肠系膜 磨片法：牙齿、耳石、贝壳 压碎法：根尖、果蝇唾液腺 分离法：木材纤维（铬酸－硝酸）、肌纤维（KOH-HNO3） 切片法 石蜡切片法：旋转切片机。周期短、切片薄且能连续切片。但是易使组织发生收缩变脆；不能切大型材料和坚硬、易碎材料。 火棉胶切片法：滑走切片机。价格贵；时间长；不能连续切片，切片较厚。但是能防止高温对材料产生的收缩现象；能包埋较大、较硬、较脆的材料。 切片法 冰冻切片法：冰冻切片机。周期很短；切片厚切不能连续切片。融化后各细胞易分散而失去相互联系。能很好保存脂肪和酶类，因而适合脂肪、神经组织和组化切片。在医学快速诊断上广泛使用。 德国Leica CM3050S冰冻切片机 第二章 显微切片的步骤和原理 取材 固定 洗涤 脱水 透明 浸蜡 包埋 切片 贴片 染色 封藏 第一节 取材和固定 一、杀死、固定和保存的概念 杀死：两层含义。一是把用于取材的动物处死；二是使用化学药品，迅速地终结生物组织的生理活性。 固定：在杀死的基础上，把组织或细胞按生活的状态固定下来，使在以后的制片过程中不发生任何变化。 保存：将固定好的材料浸泡于保存液使其不发生变质。 第一节 取材和固定 二、取材的要求 固定前按需要配制好固定液。 材料尽可能新鲜。研究正常结构时，选择健全而有代表性的部位；研究病理结构时，将病变组织同周围正常组织一起采取。 切取材料时，动作快而仔细，尽量不要损伤材料。 做好记录 第一节 取材和固定 三、 固定的理论 （一）固定作用的原理 化学作用：凝结作用 物理作用：沉淀作用 （二）固定的目的和理想的固定剂 迅速渗透，防止组织自溶和腐败 使细胞内各种成分沉淀保存下来，从而保持细胞与生活状态相近似的形态和结构 避免组织或细胞发生收缩或膨胀 能增加着色能力和媒染能力 固定剂同时能作为良好的保存剂 对组织有硬化作用，并具一定的坚韧性。但又不能使材料过于坚硬或变得松脆 第一节 取材和固定 三、 固定象 酸性固定象：在酸性固定剂中细胞分裂间期的染色质、核仁、纺锤丝等结构被保存，细胞质固定成海绵质，核质和线粒体被溶解。 碱性固定象：在碱性固定剂中染色质、纺锤丝等结构被溶解，核质和线粒体被保存，细胞质固定成透明质状态，植物细胞的液泡也能被保存。 第一节 取材和固定 四、固定剂 单一固定液的种类、性质及其应用 酒精、甲醛、冰醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、碘、锇酸 混和固定液的种类、性质及其应用 Zenken氏液、 Bouin氏液、 Carnoy氏液等等 A. 酒精 性质：液态，挥发性， 优点：渗透力强；固定时间短；具脱水功能；70%酒精可兼做保存剂 缺点：材料收缩 *还原剂，易被氧化； 不宜与铬酸、重铬酸钾或锇酸等配合使用； 常与甲醛、冰醋酸、丙酸等配合使用。 B.甲醛（福尔马林、蚁醛） 性质：气体，常见的为其水溶液，挥发性， 优点：渗透力强；对磷脂有保存作用 缺点：材料收缩；固定易过度 *还原剂，易被氧化； 不宜与铬酸或锇酸等配合使用； 常与酒精等配合使用。 C. 冰醋酸，冰乙酸 性质：液体，挥发性。 优点：渗透力强；对蛋白有保存作用 缺点：材料膨胀 *宜与铬酸、酒精、甲醛等配合使用。 D. 苦味酸 性质：三硝基苯酚（淡黄色结晶）饱和水溶液 优点：渗透力强，沉淀蛋白质，核蛋白，核酸，一般不再溶解 缺点：材料收缩 *常与冰醋酸配合使用，固定后不能用水洗涤，用酒精洗涤 E. 铬酸 性质：三氧化铬（红棕色结晶）的水溶液 ，强氧化剂 优点：沉淀蛋白质，核蛋白，