7.怎样用好液相色谱.pptVIP

流路中形成气泡引起的问题 改变保留时间和峰面积 流动相中形成气泡对液流的不良影响 泵中形成气泡使液流波动 峰变形 柱中气泡形成和累积使流动相绕流 尖峰或锯齿状噪声 检测池中气泡形成和累积产生基线噪声 1-低压计量泵; 1A,1B-时间比例电磁阀; 2-微处理机; 3-混合器; 4-高压输液泵; 5-至色谱柱 泵中气泡的排除 打开放空阀，按仪器前面板的“冲洗”功能键，用大流量溶剂冲洗系统直到流出的液体连续，证明气泡已经排除； 如果用”冲洗”状态仍不能吸液，可以用吸耳球或注射器在排液口抽吸，直至液体流出； 如果仍然无液体流出，可能是阀球阀座粘连，取出单向阀，向单向阀两端分别吹气，一通一堵为正常，两端均堵说明阀球座粘连，需清洗阀球阀座。 输液泵发生故障及相应排除措施 故障 可能原因 解决办法 高效液相色谱检测器 检测器的保养 紫外灯的保养：分析前，柱平衡差不多时，打开检测器；在分析完闭后，先关紫外灯。（频繁的开关灯会缩短灯的使用寿命） 样品池要保养 1）用HPLC级溶剂 2）过滤流动相和溶剂 3）脱气 4）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中 解决问题 漏液的主要原因： 1. 色谱柱未拧紧，多数发生再更换柱后。这时柱温箱会报警。注意，柱温箱的漏液传感器在两加热块之间的中间位置。请用吸水纸确认，因为有时单用眼观察不易察觉。 2. 连接管路两端未拧紧，或连接管路断裂。 3. 进样阀漏液，如自动进样器转子垫圈磨损造成漏液。 4. 泵漏液，开泵后将手伸入泵底部，可感到漏液。 5. 冷凝水的形成，如果使用柱温箱的降温功能，可能会有冷凝水生成从而使柱温箱显示漏液。这种情况下可取消柱温箱的检漏功能 6. 流动池漏液。 解决问题 系统压力过高。 1 首先拧开排液阀，以纯水作流动相并设流速为5ml/min若压力超过10bar，应先更换排液阀的滤芯。 2 若排液阀的虑芯没有堵塞，卸下色谱柱，然后用一两通代替色谱柱，以水作流动相设流速为1ml/min。通常压力不会超过20bar,否则系统可能有堵塞。 3 若上述的压力超过20bar,我们可按照从后到前的原则，也就是说先卸下进流动池的连接管接头，开泵后，若压力正常则流动池堵塞若仍不正常可将这段管另一端也卸下，开泵后再观察压力情况。同样道理，我们就可以找到堵塞的地方。容易堵塞的地方：流动池入口管；自动进样器的针及针座；柱温箱 1MPa=10bar=145psi 解决问题 系统压力过低，不稳定或没液流。 1 首先拧开排液阀，设流速1~2ml/min后开泵，观察有无液流，若有再仔细观察液流是否有倒吸现象如不能确定可用量筒测量流速的准确性。 2 如上述无液流，或流速不准多数为单向阀故障，或泵有严重漏液。 3 若上述流速准确但拧紧排液阀后压力不稳定，请仔细检查有无漏液。(通常漏液地方：各接口包括色谱柱，泵，进样阀等) 解决问题 峰面积重现性不好 1. 首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过高导致盐析等。 2. 若压力稳定但峰面积呈无规律变化，请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时重新配制。检查进样阀是否漏液等。 3. 若压力稳定且峰面积呈规律变化，多数为色谱柱未平衡好。 保留时间缩短 解决问题 可能原因 流速升高 色谱柱过载 键合相流失 流动相组成发生变化 温度升高 色谱柱老化 解决办法 检查泵；检查流速 降低样品的浓度或进样体积 流动相的pH值保持在2-7.5 范围内 检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解 使用色谱柱恒温箱 更换色谱柱； 使用预柱 保留时间 无规则改变 解决问题 可能原因 流速发生变化 色谱柱尚未平衡； 流动相组成发生变化； 流动相中的溶剂互溶性差 色谱柱温度发生变化 杂质在色谱柱中“堆积” 解决办法 检查是否有漏； 更换泵的密封； 排净气泡 至少用10倍柱体积的流动相平衡色谱柱； 检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解 使用色谱柱恒温箱 冲洗色谱柱； * * 怎样用好高效液相色谱 液相色谱仪的正确连接 以下示例解释了不匹配的接头导致多种色谱法问题的原因： 如果前端太长，套圈不能密封——因而会发生泄漏…… 如果前端太短，套圈可以密封——但是将会导致无效空间和混合的发生…… 液相色谱仪的正确连接 连接出现泄漏后将会引发以下问题： 系统压力损失 注射假象（鬼峰） 出现混合室（死体积）将会引发以下问题： 色谱峰加宽 分辨率减低 显著残留 裂峰 引发色谱法问题的原因很多时，接头不匹配或使用不当将可能导致液相色谱仪的所