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2018-04-03 发布于湖北
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ARTICLE IN PRESS Orthogonal Methods for Characterizing the Unfolding of Therapeutic Monoclonal Antibodies: Differential Scanning Calorimetry, Isothermal Chemical Denaturation, and Intrinsic Fluorescence with Concomitant Static Light Scattering Deniz B. Temel, Pavel Landsman, Mark L. Brader1 Protein Pharmaceutical Development, Biogen, Cambridge, Massachusetts, USA 1Corresponding author: e-mail address: mark.brader@ Contents 1. Introduction 356 2. Therapeutic Monoclonal Antibodies 357 3. Performing and Detecting Protein Unfolding 359 3.1 Differential Scanning Calorimetry 362 3.2 Intrinsic Fluorescence 364 3.3 Right-Angle Light Scattering 365 3.4 Isothermal Chemical Denaturation 367 3.5 Differential Scanning Fluorimetry 367 4. Experimental 369 4.1 Differential Scanning Calorimetry 369 4.2 Thermal Unfolding with Multimodal Detection 371 4.3 Isothermal Chemical Denaturation 373 5. Data Interpretation 376 5.1 Identifying the Fab and Fc Transitions 376 5.2 Identifying the Aggregation-Prone Domain 377 5.3 Assessing Cooperativity of Unfolding 378 5.4 Unusual Transition Phenomena 379 5.5 Using ICD fo