第二十七章菌苗和疫苗 生物制药工艺学.pptVIP

第二十七章 菌苗和疫苗 疫苗的起源可以追溯到我国古代。 早在4世纪初，东晋葛洪所著《肘后方》中，已有关于防治狂犬病的记载：“杀所咬犬，取脑敷之，后不复发”。 在宋真宗时代（公元1000年左右）宰相王达之子患了天花，四处请医无效，最后请来了峨眉山的道人，取其患处的结痂，处理后进行自体接种而治愈，这当是最早的自身免疫治疗（self-Vaccine） 。 第一节 菌苗 1883年-1885年巴斯德（Pasteur）用理化和生物学方法制备了减毒的炭疽菌苗和狂犬疫苗等。 19世纪以来用菌苗免疫人畜，明显减少了传染病的发生。其中比较成功的是破伤风、白喉类毒素疫苗的应用，其效果可达95%以上。在发达国家破伤风、白喉、百日咳、嗜血性流感的发病率明显降低。抗菌药物的发明和应用，使临床常见的细菌性感染和病死率大幅下降。 二、菌苗类制品的制备工艺 （一）菌种的选择 1、必须具有特定的抗原性； 2、具有典型的形态、培养条件、培养特性和生化特性； 3、易于在人工培养基上培养； 4、如制备死菌苗，菌种在培养过程中应产生较小的毒性； 5、如制备活疫苗，菌种在培养过程中应无回复原毒性的现象； 6、生物学特性稳定，安全性好，活力高，副作用小。 （二）培养基成分选择 碳源 氮源 无机盐 特殊添加物（特殊的碳源、氮源和生长因子） （三）培养条件的控制 1、氧分压 2、温度 3、pH值 4、光 5、渗透压 （四）杀菌 1、加热灭菌 加热使细菌悬液的温度达57摄氏度左右，维持1小时。 2、甲醛溶液杀菌 甲醛浓度控制在1%左右，37摄氏度保温24小时。 3、丙酮灭菌 1份疫苗和3份丙酮在室温防治12-24小时后去除上清。 （五）稀释、分装和冻干 一般只需稀释分装就可 为进一步延长有效期，可选择冻干处理 第二节 疫苗 至今已有30余种疫苗成功的用于人类疾病的预防。其中一半以上是病毒疫苗。如天花（poxvirus）、小儿麻痹（poliovirus）、麻疹（Measles）等曾严重危害人类生命与健康的疾病的流行得到了有效的控制。其中天花已被根除，创造了使用疫苗在自然界中彻底消灭一种病原微生物的医学奇迹。人类消灭脊髓灰质炎的目标也即将实现。 二、疫苗类制品的制备工艺 （一）毒种的选择和减毒 1、具有抗原性 2、典型的形态和感染特定的组织，传代稳定 3、能在特定的组织中大量繁殖 4、培养过程中不产生神经毒素或其他毒素 5、制备活疫苗时，无恢复原致病力的现象 6、分离和形成毒种时不被其他病毒所污染 病毒的繁殖 1、动物培养 接种于动物的鼻腔、腹腔、脑腔或皮下 接种动物的种类、年龄和接种途径依病毒的种类而异 2、鸡胚培养 接种于7-14d龄鸡胚的尿囊腔、卵黄囊或绒毛尿囊膜 接种部位视病毒的种类而定 培养简单，但是有沙门氏菌感染的可能性 3、细胞培养 原代培养 传代培养 （三）细胞的培养 1、维持液和生长液的组成 2、培养条件的控制 （1）pH值：7.0±0.2 （2）CO2浓度：5% （3）氧分压 （4）培养容器内壁洁净度 （5）细菌污染 （6）培养温度和时间：温度37℃，时间2-4天 （四）疫苗的灭活 甲醛溶液 酚溶液 灭活温度和时间 （五）疫苗的纯化 细胞培养制备的疫苗一般无需纯化 利用动物组织获得的疫苗可经乙醚纯化或经透析、浓缩或经超速离心提纯，亦可用三氯醋酸提取抗原 （六）冻干 将疫苗冷冻至共熔点一下，真空升华掉水分，再缓慢升温，真空下或充氮后保存 第三节 展望 思考题 基因工程制药的优缺点 基因工程药物生产的基本流程 为什么在基因工程制药中,不从染色体上直接分离纯化目的基因 pET载体的特点 简述获得目的基因的方法 基因表达的宿主菌有哪些，其各自表达的优缺点有哪些 蛋白质复性的方法有哪些 菌苗和疫苗的制备工艺流程 2、传统疫苗的改造（(Reconstruction of traditional vaccine） 主要针对免疫效果差，负反应大，成本较高和使用不方便的传统疫苗进行改造。 3、加强治疗性疫苗研究 （Intensification of cure vaccine research) 近年来，使用疫苗进行疾病治疗的研究发展迅速，对引起慢性或持续性感染或与诱发肿瘤十分相关的病毒病，治疗性疫苗的研究将具有重要性。 4、发展多价疫苗 多价疫苗成本低，免疫程序简单，是疫苗研究的发展方向。 其发展方向为： ①使用基因工程技术对传统疫苗进行改造，获得联合疫苗；