仪器分析教学课件作者魏培海电子教案第八章高效液相色法幻灯片.pptVIP

吸附系数 Ka与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质 及温度有关。 吸附平衡 Xm + nYa→Xa + nYm 二、 液-液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶） 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：亲水性固定液—疏水性流动相 疏水性固定液—亲水性流动相 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。 正相色谱——固定液极性 流动相极性 分离顺序：极性小的组分先出柱； 极性大的组分后出柱。 分离对象：适于分离极性组分 反相色谱——固定液极性 流动相极性 分离顺序：极性大的组分先出柱； 极性小的组分后出柱。 分离顺序：适于分离非极性组分 三、 离子交换色谱 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相—酸性水溶液 阳离子离子交换树脂作固定相—碱性水溶液 基本原理：组分在固定相上发生反复离子交换反应，基于组分与离子交换剂之间亲和力的差异进行分离。 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 选择性系数 注：Ks与离子的电荷数、水合离子半径、流动相性质、离子交换树脂性质以及温度有关 固定离子 可交换离子 待测离子 以阳离子离子交换为例： RSO3-H+ + X+ → RSO3-X+ + H+ 四、 离子色谱 传统离子交换色谱存在着两个难于解决的问题： (1)需要高浓度淋洗液洗脱且洗脱时间很长； (2)洗脱后的组分缺乏灵敏、快速的在线检测方法。 1.离子色谱法原理 　　 离子色谱法：以离子交换树脂为固定相，以电解质溶液为流动相，用于分离阴阳离子。 　　离子色谱中，应用最为广泛的的检测器为电导检测器。为消除流动相中强电解质背景离子对检测器的干扰，常设置一个抑制柱，称为双柱型离子色谱法或化学抑制型离子色谱法。 2.离子色谱法基本装置 离子色谱连续抑制装置图(以测定阴离子为例) 分离分析Br-为例 分离柱上发生离子交换： NaOH洗脱： 分离柱上流出Na+ （大量） 、Br-、OH-（大量） 抑制柱上发生离子交换： 进入检测器： H2O、HBr 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/hr。 （1）分析速度快 可在数分钟内完成一个试样的分析； （2）分离能力高 在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物分离；例：使用双柱法，在十几分钟内，可使七种阴离子完全分离。 （3）分离混合阴离子的最有效方法 （4）耐腐蚀，仪器流路采用全塑件，玻璃柱 五、 离子对色谱 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。 六、 排阻色谱色谱 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 色谱柱的两端有烧结不锈钢或多孔聚四氟乙烯过滤片，以防止柱内的填料流出。 填充好固定相后的柱子有方向性，在使用时，应使流动相的方向与柱子管外箭头标的方向一致。 四、检测器 检测器 类型 最高灵敏度（g/mL） 温度影响 流速影响 用于梯度洗脱 紫外光度(UV) 选择性 5?10-10 低 无 可以 示差折光(RI) 通用性 5?10-7 有 无 不可 荧光(FD) 选择性 10-12~10-9 低 无 可以 红外吸收(IR) 选择性 ~10-7 低 无 可以 极谱 选择性 10-10~10-9 有 有 困难 电