细胞生物学试验讲义.DOCVIP

细胞遗传学实验讲义 细胞遗传学课程组 编写 山东理工大学生命科学学院 2010．9 目 录 第一部分 遗传学实验 实验一?果蝇的性别鉴定、性状观察及饲养方法 1 实验二 果蝇的双因子杂交实验 7 实验三 果蝇的伴性遗传 8 实验四 果蝇的三点测交 10 实验五?果蝇唾腺染色体的制备和观察 12 实验六 植物有丝分裂过程中染色体行为的观察 15 实验七 植物减数分裂过程中染色体行为的观察 17 实验八 去壁低渗法制备植物染色体标本 20 实验九 植物染色体核型分析 22 第二部分 细胞生物学实验 实验一 特殊光学显微镜的原理和使用 26 实验二 电子显微镜的原理和使用 31 实验三 Feulgen反应 35 实验四 细胞融合 38 实验五 细胞膜的通透性 40 实验六 植物凝集素对红细胞的凝集作用 42 实验七 叶绿体的分离和荧光观察 43 实验八 植物细胞骨架的光学显微镜观察 45 第一部分 遗传学实验 实验一?果蝇的性别鉴定、性状观察及饲养方法 一 实验目的 1．掌握果蝇的基本特征及鉴别雌、雄果蝇的方法，熟悉常见突变型； 2．了解果蝇生活周期的特征及各阶段的形态变化； 3．掌握果蝇的饲养、麻醉等实验处理的方法和技术。 二 实验原理 果蝇属于昆虫纲、双翅目、果蝇科、果蝇属。成虫具有一对发达的膜质前翅，后翅特化为一对平衡棒。果蝇作为遗传学实验材料具有很多突出的优点：（1）容易饲养，生活周期短（在25℃下约9～10天就能完成一个世代）；（2）繁殖能力强，每只受精的雌虫约可产卵400～600粒，因此在短时间内可获得较大的子代群体，有利于遗传学分析；（3）突变类型多，研究得较清楚的突变已达400多个，且多数是形态特征的变异，便于观察；（4）染色体数目少，2n＝8，唾腺染色体较大。因此果蝇在遗传学研究中得到广泛应用。 三 实验材料、器具和试剂 实验材料 野生型果蝇 常见的突变型果蝇（黑檀体、残翅、白眼及三隐性突变体：白眼小翅焦刚毛）器具 体视显微镜、毛笔、麻醉瓶、白纸板、尸体盛留器（内装70％的乙醇或自来水）培养果蝇所需设备：生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅或温度可达160℃左右的烘箱、培养瓶、天平3. 药品或试剂 乙醚（装在滴瓶中） 配果蝇培养基的药品：玉米粉、蔗糖（食用白砂糖即可）、酵母粉（市售酵母粉即可）、丙酸、琼脂、水（蒸馏水或自来水均可）?四 实验（一）生活周期的观察 果蝇是完全变态昆虫，生活周期可分为4个时期：卵、幼虫、蛹和成虫。果蝇生活周期的长短与培养温度直接相关，最适培养温度20～25℃，温度越高，生长越快，但高于30℃引起果蝇不育甚至死亡，低温则使其生活周期延长。20℃时，果蝇卵到成虫约需15天，25℃时，从卵到成虫约需10天，在25℃时成虫约活15天。 图1 果蝇的生活周期 25℃下，成蝇一般在交配一、两天后开始产卵。果蝇四个生长时期的特点如下： 卵：白色，椭圆形，长约0.5mm，前端背面有一对触丝能使卵附着在食物上。受精卵在24小时内就可孵化成幼虫。 幼虫：从卵孵化出来后，经过两次蜕皮，发育成三龄幼虫。此时幼虫体长4-5mm，幼虫头尖尾钝，头上有一黑色钩状口器。幼虫活动力强而贪食，它们在培养基上爬行时，留下很多条沟，沟多而且宽时，表明幼虫生长良好。幼虫生活4天左右开始化蛹。 蛹：化蛹前三龄幼虫停止摄食，爬到相对干燥的表面上（如培养瓶壁），逐渐形成菱形的蛹，起初蛹壳颜色淡黄而柔软，以后逐渐硬化，变为深褐色，表明即将羽化了。 成虫：刚从蛹壳里羽化出来的果蝇虫体比较长，翅膀尚未展开，体表尚未完全几丁质化，故呈半透明的乳白色。透过腹部体壁，可以看到黑色的消化系统。不久，变为短粗圆形，双翅展开，体色加深。从蛹壳中羽化出来的果蝇8～12小时即可交配，交配后精子可在雌蝇的受精囊中贮存一段时间，然后逐渐释放到输卵管中。未交配的雌果蝇称为处女蝇。 果蝇杂交实验必须选用处女蝇，因此选择处女蝇的时间是在羽化后12小时以内（为保证实验准确可靠，以选择羽化后8小时以内的雌蝇为好）。收集处女蝇的方法是：选择一个果蝇生长良好、含有较多即将羽化的蛹的培养瓶，清除其中所有成蝇。清除成蝇后的12小时（8小时更为可靠）内，从该瓶中收集到的雌蝇即为处女蝇，反复收集直到数量足够应用为止。处女蝇单独存放在一个新的培养瓶中，最好在距杂交实验前一星期左右开始收集处女蝇这样能将收集到的处女蝇存放几天以检验“处女性”。如培养3～5天后瓶中出现幼虫说明收集失败，得重新收集。不同时间收集的处女蝇最好分开存放。 （二）果蝇的形态特征和常见的突变类型 1．雌雄果蝇的鉴别 雌雄果蝇的主要区别见表1和图2, 图3, 图4。 表1 雌雄果蝇的主要区别 ? ♀ ♂ 大小 大 小 形态 腹部末端稍尖 腹部末端呈钝圆形 颜色 腹部末端色浅，腹部背面呈5条黑色条纹