1.组织学技术PPT.pptVIP

A细胞 B细胞 D细胞 心内膜模式图 实用组织学与细胞化学 研究技术 组 织 学 技 术 一 组织学技术的发展与应用 内 容： 组织学制片技术、胚胎学制片技术、组织化学技术、荧光技术、免疫组化技术、组织培养技术、组织工程技术等。 光学显微镜技术：特殊显微镜技术（荧光、倒置、相差）、显微摄影技术等 电子显微镜技术：电镜技术、电镜细胞化学技术等 应 用：Hooke发现细胞，1811年改良了显微镜—组织学基础。但是，不能看到透明的切片标本。 1851年，发现卡红可染细胞核，1865年，苏木精能染细胞核。 十九世纪20年代Feulgen创立核酸反应。 30年代，相继发明了相差显微镜。 特别是，50年代组织化学与电镜技术迅速发展和提高，组织学技术进入了新时期。 二 组织切片方法分类 1．切片法：石蜡切片、明胶切片、火棉胶切片、电镜超薄切片等（微米） 2．涂片法：血液等液体 3．磨片法：骨等坚硬组织 4．分离制片法：分离单个细胞—平滑肌细胞、肝细胞等 5．印片法：肝、脾、淋巴结等 6．活体制片：注射胎盘兰等，观察巨噬细胞的活动 7．超活体染色制片：活体观察精子形态与活动等 8．整体切片法：用大型切片机，人胚、肝、肾、脑等 ? ? 组织制片技术 普通制片技术—HE切片术 一 基本程序 (一). 动物取材 必须根据科研或教学的目的与要求确定，医学领域以人的材料为最好，高级动物猴、猫（肋间肌——运动终板）、豚鼠（内耳、胰岛）、狗（鼻粘膜——嗅觉细胞）、兔（耳壳——弹性软骨、回肠——潘氏细胞）等。 1．乙醚吸入麻醉：小鼠、大鼠、豚鼠等。在玻璃缸内进行。（内脏充血） 2．注射麻醉法：苯巴比妥、乌拉坦等，猴、猫、狗、兔等大型动物，静脉或腹腔注射。（1-2ml/kg) 3． 直接杀死法：小鼠、大鼠、豚鼠等，用金属器械猛击后脑部—第四脑室区。 ? 取材顺序： 1． 腹腔器官： 肝、胆、胃、肾上腺、胰、脾、 十二指肠、空肠、回肠、结肠等 2．胸腔器官： 心脏、肺 3．盆腔器官： 膀胱、卵巢、输卵管、子宫等 4．神经系统： 大脑、小脑、脊髓等 5．眼球、内耳 ? 固定液：应具有以下性能 1. 对蛋白质、脂肪、类脂体、碳水化合物等具有沉淀、凝固作用。 2. 具有一定穿透力—迅速进入组织。 3. 对组织不引起收缩或膨胀。 4. 对组织产生一定的硬化作用。 5. 具有一定pH值。 6. 对染色无副作用。 ? 常用固定剂： 1. 单纯固定剂： 甲醛、乙醇、丙酮、重铬酸甲、锇酸等。 甲醛： 常用，pH值为中性。穿透组织速度快，固定均匀，组织收缩小。它是蛋白质最好的固定剂，在组织化学中广泛应用。 乙醇： 常用的固定剂与保存剂，穿透组织速度快。具有固定、凝固蛋白质作用，亦具有硬化组织和脱水等作用。 丙酮： 可作固定剂与脱水剂，对某些酶（碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等）固定效果好。 锇酸： 强氧化剂，不能与甲醛、乙醇等混合。使蛋白胶状固定而不发生沉淀，为脂肪、类质脂、髓鞘等优良固定剂。目前为电镜标本常用的固定剂。 2. 混合固定剂 ： 甲醛混合固定剂、乙醇混合固定剂、丙酮混合固定剂、重铬酸甲混合固定剂、锇酸混合固定剂等。 ? （三） 冲洗 目 的： 1．停止固定液继续对组织的作用。 2．除去组织中多余的固定剂，以免影响染色。 方 法： 1 简易流水冲洗法。 2． 系列玻璃瓶或水槽冲洗法。 ?(四）脱水 目 的： 1. 除去组织中含有的水分—脱水。 2. 脱水后便于石蜡包埋等。 脱水剂：乙醇、丙酮、正丁醇等。 方法：由低浓度逐渐升高浓度，以避免组织收缩。 2～3mm 5mm 50%Alc 6～8h 6～12h 70% 6～8h 6～12h （过夜） 80% 4～6h 6～8h 95%（Ⅰ） 2～4h 3～6h 95%（Ⅱ） 2～4h 3～6h 100%（Ⅰ）