磁珠固定多抗预测最大吸附活性识别阳性突变体.pdfVIP

( ) 第 卷第 期 西 安 交 通 大 学 学 报 医 学 版 38 5 Vol.38No.5 年 月 ( ) 2017 9 JournalofXi’anJiaoton Universit MedicalSciences Se.2017 g y p ◇技术方法研究◇ 磁珠固定多抗预测最大吸附活性识别阳性突变体 , , , 种慧敏 冯一然 杨晓兰 廖 飞 　 ( , ) 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室 重庆　400016 : / , 摘要 目的 考察磁珠固定多抗吸附细胞裂解液中酶 突变体 分析吸附酶活性对样品蛋白量响应曲线预测最大吸附 　 ( ) 。 ( ) 活性 用于比较识别阳性突变体的可靠性 方法 纯化重组表达大肠杆菌碱性磷酸酶 及绿脓杆菌芳香硫 Vs 　 ECAP ( ) ; 。 酸酯酶 为免疫原 兔抗血清用 硫酸铵分级和 纤维素层析纯化得多抗 磁珠羧基活化后固定多 PAAS 33% DEAE- ; , ; 。 抗 用对硝基酚显色底物 碱终止后测定 吸收增量反映酶活性 分析吸附响应曲线预测 结果 多抗磁珠 405nm Vs 　 吸附酶的容量约 / 磁珠。 比活性超过 比活性 倍。 突变体 较野生型比活性提 2.0mgg ECAP PAAS 70 ECAP R168K , ; , 高约 用 多抗磁珠反应 即可预测 识别此阳性突变体 用 突变体 为起始酶 用 50% 2.5μg 10min Vs PAAS G138S , 。 多抗磁珠测定吸附酶反应 后吸收预测 能识别活性提高