第二章人工授精技术PPT.ppt

第二章 授精技术 ;第一节 人工授精(AI)的基本流程;（3）种公畜的准备 ①精液的质量与公畜饲养管理、运动和配种利用是否合理有密切的关系。 ②爬跨和诱情方法 让公畜在母畜附近作瞬间停留，或进行多次假爬跨；更换台畜，改变台畜位置；观摩另一头公畜爬跨等等 。;2、采精技术 （1）假阴道法 ： 牛、羊、马、驴、兔 （2）手握法： 猪 （3）筒握法 ：1和2的结合 （4）电刺激法：育种价值高、因损伤或性反射慢等失去爬跨能力；不适宜用其他方法采精的动物。 （5）按摩采精法： 牛、犬和禽类的采精 ;3、采精频率 指每周对公畜的采精次数。 牛：2-3天，每天可连续采精两次，间隔20min。第二次的数量和质量较好。青年公牛应当酌减。 猪：射精量大，适当控制。成年隔日采精一次。青年公猪（1岁左右）和老龄公猪（4岁左右）每周以采精2次为宜。 绵、山羊：配种季节短，射精量少；而睾丸体积较大，精子的生产量及贮存量相对较大。因此，在配种季节内集中连续每日采精3~4次均可，每周应休息一天。 ;三、精液的稀释 ;①缓冲物质：柠檬酸钠、磷酸二氢钾、Tris ②非(弱)电解质 ：糖类、氨基乙酸、 ③防冷刺激物质 ：卵黄和奶类 ④抗冻物质 ：甘油和DMSO ⑤抗菌物质 ：抗生素;抗生素对猪精液保存效果 ;⑥其他添加剂 酶类:超氧化物歧化酶 ( SOD ) 激素类：OXT 其他：褪黑激素 (MT) 、维生素C、CO2、 己酸、ATP、精氨酸、咖啡因 ;SOD对羊精液保存效果 ;褪黑激素对猪精液保存效果 ;2、精液稀释原则与方法 ;3、精液的稀释倍数 ①畜种特征 ： 羊、牛高，猪、马低 ②稀释液种类 ： 奶类倍，糖类低 ③保存方法： 冷冻低，液态高 ④每头份最低活精子数：牛0.05-0.1亿、羊0.5亿、猪2.0亿、马1.5亿 以牛为例：若射精量为8ml，每ml精子数为12亿，活精子数为70%，每次输精最低活精子数为500万，则稀释倍数为12亿×70%÷0.05亿=168倍;四、精液保存：常温、低温、超低温 （第二节介绍） 五、授精 （insemination） 1、输精前的准备 （1）器械洗涤和消毒 （2）母畜：保定，外阴擦洗、消毒。 （3）精液品质：液态=0.6，冷冻=0.3 2、输精的基本技术要求 （1）输精量和输入的活精子数 根据畜种和精液保存的方法确定;（2）输精时间：一般说来，各种动物都适宜在排卵前4h-6h进行输精。在生产中，常用发情鉴定来判定适宜的输精时间。 （3）输精次数和间隔时间：依据输精时间与母畜排卵时间的间距，以及精子在母畜生殖道内保持受精能力的时间长短决定 （4）输精部位：牛子宫颈深部；猪、马、驴子宫内；羊、兔子宫颈内浅部;第二节 精液保存技术 ;一、液态保存;（2）稀释液 ①牛：现已不多用 ②猪：全份15℃～20℃最适宜 加入MT可达6-7天，最长可达17天 ③马、绵羊： 10℃～14℃绵羊48h，马120h （3）操作方法 隔水降温法；直接放在地窖或水井 ；恒温冰箱;2、低温保存 （1）原理：冷刺激，须加卵黄等抗冷冻物质，以提高精子的抗冷冻能力。 （2）稀释液 ①牛： 0℃-5℃可达7d ②猪：浓份或离心后，5℃-10℃达3d ③马、绵羊：生产中不普遍 （3）操作方法 ： 逐步降温 ;二、冷冻保存 ;2 、冷冻损伤易感性的决定因素 2.1 甘油对不同品种精液冷冻保存的利弊效应 牛、野生反刍动物及灵长类 4-8% ，猪 =3% ，鼠 = 1.75% 有袋类 4-8%：刷尾猫70-90%存活，肥尾 dunnart 仅3%存活 ，15-20%甘油对刷尾猫仍很好 膜通透性的品种差异造成的，还受膜结构和功能的影响 ;2.2 膜脂组成的品种差异 精子质膜固醇浓度低，不饱和脂肪酸高时的冷刺激（突然冷却但不结冰的冷冻损伤）更为严重，这可解释禽与人精子较牛羊精子更能经耐受冷刺激，但不能解释冷冻解冻后精子的活力和受精率之间的差异。 技术程序如慢冷却、添加卵黄、乳蛋白可使冷刺激效应最小化。 但最显著的冻伤害可能发生冷冻解冻过程中，这表明膜脂组成的差异并没有那么重要。;2.3 其它潜在因素 将不同品系的鼠精子简单置于未经冷冻的冷冻保护剂中，A、B受胎率降低，C不影响；冷冻后，C体外受精获得61.2%的2-细胞胚胎，A、B仅分别获得17.2%和3.0%的2-细胞胚胎。进一步实验表明，这些差异主要是由精子对添加和去除冷冻保护剂产生的渗透压变化的敏感性不同而造成的，这又指出了质膜特性是冷冻后精子成活