大蛋白可诱导肝细胞空泡化-中国科技论文在线.PDFVIP

中华微生物学和免疫学杂志2OO4年4月第24卷箍 塑 |n』 )b 塑 A』 ， !丝! ： ·279· ． 病毒学． 剪接导致截短的乙型肝炎病毒表面抗原 大蛋白可诱导肝细胞空泡化 林旭 黄清玲 郑大利 徐晓 陈凌 林建银 【摘要】 目的 研究458～1308nt乙型肝炎病毒(HlⅣ)基因组剪接变异体截短的表面抗原大蛋白 (1arge suFface antigen，IS)的肝细胞致病性。方法 将458～1308nt剪接变异体HBV DNA(基因号为 AY238972，长度为23~bp)及全长HBV DNA(基因号AY206390，长度3215bp)中PreS2及S起始密码由ATG 定点突变为ACG。以突变后的剪接变异体DNA为模板，PCR扩增剪接产生的截短Ls编码基因( splice)及Ls氨基端276个氨基酸的编码基因(L )；以突变后的全长HBV DNA为模板，PCR扩增全长 LS编码基因。将上述DNA片段克隆至pCDNA3．1／}}yg(一)真核表达载体。重组载体以脂质体转染HepG2 及chang肝细胞，以HE染色观察细胞的空泡病变，并以流式细胞仪检测转染细胞的凋亡率。结果 表 达IS、Is-splice、 的重组载体转染后均可引起HepG2及Chang肝细胞发生空泡样病变。此外，LS可 引起n~pG2及chang肝细胞凋亡，而Ls玎6、Is-splice致肝细胞凋亡作用消失。结论 458—1308nt HBV基 因组剪接变异体产生的截短Ls可致肝细胞病变，其作用与其氨基端276个氨基酸有关。该类型HBV 基因组剪接变异体在乙型肝炎发生发展中可能具有一定作用。 【关键词】乙型肝炎病毒；RNA剪接；基因突变；表面抗原；转染 Cellular vaamlimtion induced by trtmeatcd large酬I antigen ofhepatitis B virus due to pregmo~c RNA soling HN Xu，HUANG Qing-ling，zHENG Da-li，XU Xiao．CHEN Ling．UN Jian-yin．Research Cenler of Molaular Medicine，F~ian Medical University．Fuzhou ，China G 佣咖 alithor：￡ ，Erna／／：／inxuT0@hotma／／．com 【Abs 】 Objective To investigate the pathogenecity oftruncated large surface pmteingenerated by 458- 1308nt spficed variant of HBV genone．Methods Substituted the initial codon of PreS2 and S region from ’G to ACG in full-length(accession number：AY206390，3215bp)and 458—1308nt spliced variant(accession number AY238972，2366bp)of HBV DNA by m,9~llS of site-directed mutagenesis．Amplified the coding on for tnmcated large surface protein(Is-splice)and amino-terminal 276 amino acids(LS )using mutated 458—1308ntⅦBV DNA as the template，and amplified the coding region for full—length large surface antigen(LS)using mutated full—length HBV DNA as the template