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同源重组试剂盒说明书
专注品质 助力科研 电话：0755/0755 QQ 2455999555 邮箱 ：info@ 网址 ： 地址：深圳市龙岗区南岭创意园生物研究院 同源重组试剂盒说明书 Ø 产品概要 同源重组试剂盒是一种简单、快速并且高效的DNA定向可将插入片段 PCR产物定向克隆 至任意载体的任意位点。将载体在克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入 线性化克隆载体末端序列,使得插入片段 PCR产物5’和3’ 最末端分别带有和线性化克 隆载体两末端对应的完全一致的序列(15 bp~20 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR 产物和线性化克隆载体按一定比例混合后,在 Exnase的催化下,仅需反应30 min即可进行 转化,完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。 产品优点 -简单、快速、高效 -适用于向几乎任何载体在任何位点进行定向克隆 -无需考虑插入片段自身携带的酶切位点 -可高效克隆50 bp~10 kb片段 -不依赖于连接酶及磷酸酶,克隆阳性率可达95%以上 -线性化克隆载体和 PCR产物可不进行纯化直接克隆 应用范围 -快速克隆 -高通量克隆 -无缝克隆 -DNA定点突变 Ø 产品保存 本产品应置于-20°C储存,使用过程中尽量避免反复冻融。 Ø 产品组成 组分 KT801-01 （25 rxn ） KT801-02 ( 50 rxn ) 5 X CE II Buffer 100 μl 200 μl Exnase II 50 μl 100 μl 500 bp control insert(25 ng/μl) 5 μl 5 μl pUC19 control vector ， 5 μl 5 μl ,linearized （50 ng/μl ） Ø 实验方案 1 实验流程概览 （1 ）.线性化克隆载体制备 （2 ）.插入片段扩增引物设计 （3 ）.插入片段 PCR扩增 （4 ）.进行重组反应 （5 ）.反应产物转化、涂板 （6 ）.克隆鉴定 2 制备线性化载体 选择合适的克隆位点，并对克隆载体进行线性化。我们推荐您尽量选择无重复序列且GC 含量均匀的区域进行克隆。当载体克隆位点上下游20bp区域内GC含量均在40%~60%范 围之内时，重组效率将达到最大。 克隆载体线性化方式可以为限制性内切酶酶切消化,也可以为反向 PCR扩增。 A 线性化克隆载体由酶切制备 双酶切线性化 线性化完全,转化背景(假阳性克隆)低。推荐使用。 单酶切线性化 线性化程度较差。可适当延长酶切时间以降低转化背景。 注：本产品无 DNA连接酶,不会发生载体自连反应。因此,即使是 以单酶切方式制备的线 性化载体也无需进行末端脱
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