同源重组法构建副干酪乳杆菌组氨酸蛋白激酶基因缺失突变株-食品科学.PDFVIP

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2018-02-02 发布于天津
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同源重组法构建副干酪乳杆菌组氨酸蛋白激酶基因缺失突变株-食品科学.PDF

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同源重组法构建副干酪乳杆菌组氨酸蛋白激酶基因缺失突变株-食品科学

※生物工程食品科学 2017, Vol.38, No.12 15 同源重组法构建副干酪乳杆菌组氨酸蛋白激酶基因缺失突变株 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2,* 岳元春，王洋，由田，高冬妮，平文祥，葛菁萍（1.黑龙江大学生命科学学院，微生物省高校重点实验室，黑龙江哈尔滨 150080 ； 2.黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心，黑龙江哈尔滨 150500 ）摘要： Lactobacillus paracasei prcK prcK 构建副干酪乳杆菌（）组氨酸蛋白激酶基因缺失突变株，为基因功能 prcK Tetr 基因），将其电转化进入L. paracasei 研究提供实验工具。采用同源重组技术构建质粒pKLKRT （含 :: prcK Tetr 基因同源重组到L. paracasei HD1.7 的染色体上，通过四环素耐药、氨苄青霉素敏感 HD1.7 中，使 :: 等特性筛选出含有prcK ::Tetr 基因的新L. paracasei HD1.7 。结果表明，经聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ，PCR ）验证及酶切验证后确定质粒pKLKRT构建成功，并成功转化入L. paracasei HD1.7 中，经PCR确认 L. paracasei HD1.7 prcK 基因缺失突变株构建成功。该突变株产生的细菌素效价比出发菌株低23.61% 。采用同源重组方法成功构建L. paracasei HD1.7 prcK 基因缺失突变株，为研究L. paracasei HD1.7群体效应相关基因的分子机理奠定基础。关键词：副干酪乳杆菌；细菌素；组氨酸蛋白激酶基因；同源重组 Construction of prcK Gene Deletion Mutant of Lactobacillus paracasei by Homologous Recombination 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2,* YUE Yuanchun , WANG Yang , YOU Tian , GAO Dongni , PING Wenxiang , GE Jingping (1. Key Laboratory of Microbiology, Life Science College, Heilongjiang University, Harbin 150080, China; 2. Engineering Research Center of Agricultural Microbiology Technology, Ministry of Education, Heilongjia