胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的体外耐药性研究.docVIP

精品论文 参考文献 胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的体外耐药性研究 汪传一 (河南省洛阳市东方医院普外二病区 471000) 【摘要】目的：探讨胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的体外耐药性。方法：经胰腺癌肿瘤干细胞表面标记途径和侧群(SP)细胞途径，分离人胰腺癌细胞株PANC-1内SP/NSP(非SP)细胞、CD44+CD24+/CD44-CD24-细胞亚群，采取MTT方法检测亚群细胞体外化疗药物耐受性，经实时荧光定量PCR检测耐药基因 ABCG2、ABCB1 和 PLK-1 表达情况。结果：人胰腺癌细胞株PANC-1内SP细胞构成比为(7.58plusmn;0.54)%，CD44+CD24+细胞构成比(2.58plusmn;0.85)%；SP、CD44+CD24+细胞化疗耐受性更强、抗凋亡效果更为明显；经荧光定量RT-PCR表明，SP、CD44+CD24+细胞耐药基因 ABCG2、ABCB1 和 PLK1具有较高表达。 结论：人胰腺癌细胞株PANC-1内SP 及 CD44+CD24+细胞存在明显化疗耐受性。 【关键词】胰腺癌 PANC-1 肿瘤干细胞 耐药性 【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）19-0251-02 胰腺癌属于临床中恶性消化道肿瘤，患者5年生存率低于5%，中位生存期4-6个月。胰腺癌对放化疗并不具有较高敏感性，当前胰腺癌一线化疗药物吉西他滨可以缓解患者疼痛和降低体重减轻等，但无改变胰腺癌治疗状况[1]。本文对胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的体外耐药性进行分析，现报告如下。 1 资料与方法 1.1一般资料 本文选取合适人胰腺癌细胞株PANC-1，并应用适宜DMEM培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、吉西他滨、Trizol Reagent试剂盒、AMV 反转录试剂盒、低速离心机、二氧化碳细胞培养箱等。 1.2方法 取对数生长期的PANC-1细胞，进行SP 细胞检测和分选，CD44+CD24+细胞分选，将所分选SP细胞、NSP细胞、CD44+CD24+、CD44-CD24-细胞分别接种到96孔板，每孔细胞1times;104个(200mu;L)，培养持续12h 加进梯度浓度吉西他滨，浓度梯度分别是0.1、0.33、1、3.3、10、33、100 mu;mol/L， 每浓度组设立4个复孔，另取对照组(不加药)及空白对照组(培养基加 MTT 加二甲基亚砜)[2]。经细胞培养箱持续培养72h，每孔加入5g/L MTT20mu;L，然后经4h培养,除去上清液??每孔加入DMSO 150mu;L，经避光震荡连续10min，应用全自动酶标仪读板，波长490 nm。重复试验3次，计算IC50。将Annexin V 加入PI双染检测细胞凋亡情况，荧光定量RT-PCR检测基因表达。 2 结果 经SP细胞检测，人胰腺癌细胞株PANC-1中SP细胞比例为(7.58plusmn;0.54)%(n=8)，维拉帕米拮抗后SP构成比降低，接近零或完全达到零。可建立通道 R1、 R2分别采集SP细胞、NSP细胞。经流式细胞仪检测，PANC-1细胞内CD44+CD24+细胞构成比为(2.58plusmn;0.85)%。计算各细胞亚群IC50，SP 细胞(20.68plusmn;1.46mu;mol/L)相比较NSP(3.93plusmn;0.85 mu;mol/L)显著上升；CD44+CD24+(12.45plusmn;0.42mu;mol/L)相比较CD44-CD24-(3.85plusmn;0.64mu;mol/L)显著增加，差异均有统计学意义(P﹤0.05)。经流式细胞仪检测细胞凋亡情况表明，1、 10mu;mol/L 吉西他滨持续发挥72h作用后，比较NSP 和 CD44-CD24-，SP、CD44+CD24+细胞对于吉西他滨所引发细胞凋亡更具有耐受，各细胞亚群凋亡率如表1所示。 表1 各个细胞亚群不同浓度凋亡率对比 药物浓度(mu;mol/L) SP NSP CD44+CD24+ CD44-CD24- 1 11.35plusmn;0.85 13.485plusmn;0.95 14.525plusmn;1.26 13.975plusmn;1.58 10 13.215plusmn;1.54 64.255plusmn;2.64 23.495plusmn;3.16 70.595plusmn;2.