紫云黑豆裂解液对小鼠免疫功能的影响.docVIP

精品论文 参考文献 紫云黑豆裂解液对小鼠免疫功能的影响 马金荣1 朱丽丽2 张丽萍2 昌友权2 曹柏营2 白宝兰2 李沛光3 （1白城中心医院 吉林白城 137000） （2吉林工程技术师范学院 生物与食品工程学院 吉林长春 130052） （3吉林亚泰明星制药有限公司 吉林长春 130114） 【摘要】目的 研究紫云黑豆裂解液对小鼠免疫功能的影响。方法 测定紫云黑豆裂解液对小鼠淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬活力及溶血素生成的影响。结果 紫云黑豆裂解液明显增强B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖,促进小鼠巨噬细胞的吞噬活力和溶血素抗体生成。结论 紫云黑豆裂解液明显增强小鼠的细胞免疫和体液免疫功能。 【关键词】紫云黑豆裂解液 免疫功能 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）35-0048-02 紫云黑豆，是经过多年的研究培植出来的新型蔬菜类新品种，它具有极强的生命力、极强的适应能力，适合不同的质的土壤，它具有独特的植物特性，能在其他农作物不能生长的贫脊土地上、恶劣的环境条件下顽强生长，紫云黑豆每公顷产10公斤以上。紫云黑豆中含有大量的全价蛋白,十八种氨基酸种类齐全,配比均衡,且必需氨基酸含量丰富,高达50%以上[1],是一种比大豆蛋白更具营养价值的优质蛋白质资源，在医药保健及美容等方面具有较高的利用价值。近年的大量研究发现,裂解液在免疫、降血糖、抗肿瘤等方面具有广泛的生理活性[1～2],本文研究了紫云黑豆裂解液(PD)对小鼠免疫功能的影响,为开发紫云黑豆裂解液在医药领域中的应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验仪器 酶联免疫测定仪。UV2201紫外分光光度计;YKH-III旋涡混合器;LXJ-离心机;二氧化碳培养箱。 1.2 实验动物 昆明种小鼠,体重20plusmn;2g, ♀ ♂各半;豚鼠, ♀ ♂不限。 1.3 试药 紫云黑豆裂解液由长春市昌达天然植物开发有限公司提供。RPMI1640培养基,用时配成培养液,加入2mmol?L-1谷氨酰胺、青霉素60 mg?L-1、链霉素100 mg?L-1,加入5%灭活新生小牛血清(NCS)。刀豆蛋白(Con A),用RPMI1640培养基配成100 mg?L-1,滤过除菌后备用。脂裂解液用RPMI1640培养基配成600 mg?L-1,滤过除菌后备用。MTT用0.07 mmol?L-1 pH7.5PBS配成5g?L-1溶液,滤过除菌后备用。鸡红细胞抽取静脉血,按常规方法制备CRBC悬液。 1.4 补体制备 从3只豚鼠心脏取血,制备混合血清,用生理氯化钠溶液配成10%的混合血清,作为补体备用。 1.5 对小鼠免疫器官重量的影响 取小鼠40只,随机分成4组,每组10只。第一组为对照组,第2、3、4组分别ig紫云黑豆裂解液50、100、150mg?kg-1?d-1,对照组灌服等体积生理氯化钠溶液,连续给药8d。各组动物于末次给药后24h处死,取脾脏和胸腺,用滤纸吸干水份后在分析天平上称重计算脏器系数。 1.6 对小鼠巨噬细胞(MPhi;)吞噬功能的影响 小鼠40只, ♀ ♂各半,按体重、性别随机分成4组,每组10只。ig给药,连续9d。给药5d后ip3%硫乙醇钠培养基2ml,注射4d后,用含5%NCS和肝素的无酚红Hank，s液6ml冲洗腹腔,取出腹腔液,经1000r/min离心10min。将细胞用Hanks液洗涤3次,重悬后,用含5%NCS RPMI 1640培养基调整细胞浓度成1times;106?ml-1,加入96孔板,每孔100mu;l。置37℃温育4h使巨噬细胞贴壁,甩去未贴壁细胞液。用Hank，s液洗板3次,甩干后加入0.072%中性红溶液,每孔100mu;l,再置37℃ 30min后,甩去未吞噬的中性红溶液。再用Hank，s液洗板3次,甩干后每孔加入细胞溶解剂200mu;l,摇匀后置4℃冰箱过液,细胞溶解。测A值,检测波长530nm。 1.7对淋巴细胞增殖的影响 小鼠种属、分组同2.2,ig给药,连续9d。最后一次给药后断颈椎处死小鼠,无菌取脾研磨,过200目不锈钢筛,制成单个细胞悬液。离心去上清,将细胞重悬于RPMI1640培养基中,进行细胞计数。调整细胞浓度为3times;106.ml-1,加96孔板,每孔200mu;l,共加2块板,其后,一块板再加入Con A,每孔10mu;l,观察T细胞增殖反应。另一块板再加入LPS,每孔10mu;l,观察B细胞的增殖反应。将板置37℃ 5%CO2培养箱内培养60h,取出板每孔弃去上清液10