脊髓全横断损伤后凋亡因子Fas和FasL的表达变化研究.pdfVIP

脊髓全横断损伤后凋亡因子Fas和FasL的表达变化 脊髓全横断损伤后凋亡因子Fas和FasL的表达变化 研究生 杨晓华 导 师 李 明 教授 王廷华 教授 摘 要 f目的!:通过制备SD大鼠脊髓全横断性损伤模型，应用免疫组织化学A日C法， 揭示促凋亡因子Fas和FasL与脊髓在完全性损伤后的不同时间点之间的相互变 化趋势 以探讨 a「s和 a「sL在脊髓损伤中的作用。 方【法1:SD成年雌性大鼠30只，体重 180-220克，随机分成6组，每组5只。 此6组分为正常组，损伤后 1天，3天，7天，14天，21天组。氯胺酮和安定腹 腔麻醉后，4%多聚甲醛固定液经心脏升主动脉插管灌注固定动物。取损伤以下 尾侧脊髓入4%多聚甲醛固定液中做后固定。修块后入30%sucrose-PBS液沉底。 其后在一20℃恒冷切片机下制作20pm厚的连续冰冻切片，间隔取片后分别以抗 Fa。和Fast抗体行免疫组化ABC染色。在Olympus光学显微镜下观察对照组， 损伤后不同时间段组中Fas和FasL蛋白在SD鼠脊髓灰质前角神经元的表达分 布情况。应用HPIAS-1000高清晰图像分析系统测量脊髓灰质前角神经元的灰度 以对Fas和FasL免疫阳性反应物进行量化测定。 !结果1:1、正常和脊髓全横断损伤后的不同时间组的SD大鼠脊髓灰质的前角神 经元中均可观察到Fas和FasL的免疫阳性反应物。2,Fas和FasL的免疫阳性反 应物在不同时段的分组中表达变化不同。(1)正常组Fas阳性神经元细胞数与1 天组，3天组，7天组，21天组比较有显著性差异 (p0.05)，然与14天组相比 则无显著性差异 (p0.05)。其中1天组，3天组，7天组Fas阳性神经元细胞数 较正常组高，而21天组则较正常组低。1天组与3天组相比无显著性差异 (P 脊髓全横断损伤后凋亡因子Fm和FasL的表达变化 0.05)，它们的Fas阳性神经元细胞数高于其他各组。7天组，14天组与21天组 相比有显著性差异 (p0.05)且7天组，14天组阳性细胞数高于21天组。其余 各组间比较无显著性差异。(2)正常组Fas阳性神经元平均灰度值与I天组，3 天组，7天组相比有显著性差异 (p0.05)，与14天组，21天组比较无显著性差 异 ((p)0.05)。正常组平均灰度值高于1天组，3天组，7天组。I天组Fas阳性 神经元平均灰度值与3天组，7天组比较无显著性差异 (P0.05)，与14天组， 21:k组有显著性差异(pU5)，且1天组的平均灰度值低于14天组和21天组。 3天组与21天组有显著性差异(P0.05)，它的的平均灰度值低于21天组。余各 组间比较无显著性差异。(3)正常组FasL阳性神经元细胞数与 1天组，3天组， 7天组，14天组，21天组比较有显著性差异((P0.05)，其中正常组FasL阳性神 经元细胞数低于1天组，3天组，7天组，14天组，而高于21天组。1天组FasL 阳性神经元细胞数与3天组比较无显著性差异 (p0.05)，余各组间比较均有显 著性差异，且随着时间的推移FasL阳性神经元细胞数逐渐降低。(4)正常组FasL 阳性神经元平均灰度值与14天组，21天组相比无显著性差异 (pU5)，与1 天组，3天组7天组比较有显著性差异(P0.05)，其中正常组的阳性神经元平均 灰度值高于1天组，3天组，7天组。1天组，3天组与14天组，21天组相比有 显著性差异 (p0.05)，它们的阳性神经元平均灰度值低于14天组和21天组。7 天组 FasL阳性神经元平均灰度值与 14天组和 21天组比较有显著性差异 (P0.05)，且7天组阳性神经元平均灰度值低于14天组和21天组。其余各组 间比较均无显著性差异。 I结论1:1、正常大鼠脊髓灰质的前角神经元均有Fas和FasL的表达，提示Fas 和FasL共同参与了脊髓灰质前角的神经元的生理功能活动。2、大鼠脊髓全横 断损伤后在损伤节段以下尾侧脊髓前角神经元Fas与FasL表达共同经历了一个 由增高到逐渐降低的过程。提示Fas和FasL在脊髓损伤后表达增加有诱导神经 细胞凋亡的趋势，其有可能参与诱导了脊髓迟发性损伤;随后，Fas与FasL表