生物选修三第一章复习.pptVIP

1、基因工程的概念（又叫做DNA重组技术） 操作：生物体外 DNA分子水平 优点：目的性强，定向改造生物的性状。 专题1 基因工程 2、基因工程的原理：基因重组 3、基因工程的基本工具 限制酶 DNA连接酶 载体 ①分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） 来源：主要是从原核生物中分离 功能：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 结果：黏性末端和平末端。 一种限制酶识别一种序列，不同的限制酶识别不同序列。 ②.“分子缝合针”——DNA连接酶 E·coliDNA连接酶 来源：大肠杆菌 作用：黏性末端之间的磷酸二酯键 T4DNA连接酶 来源：T4噬菌体 作用：能缝合两种末端，但连接平末端 的效率较低。 DNA聚合酶：只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶：是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 ③.“分子运输车”——载体 载体具备的条件：A.能在受体细胞中复制并稳定保存。B.具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。C.具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 最常用的载体：质粒, 结构简单的、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 载体种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 4、基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取 目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 ?基因文库中获取（基因组文库，cDNA文库） 目的基因转录的mRNA----单链DNA----双链DNA 反转录 酶 蛋白质的氨基酸序列----mRNA序列-----结构基因的核苷酸序列------目的基因 推测 化学合成 推测 ?PCR技术扩增——原理：双链DNA复制 条件：引物 模板DNA 四种脱氧核苷酸 热稳定DNA聚合酶 过程： 第一步：加热90～95℃ 氢键断裂，DNA解链； 第二步：冷却55～60℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热70～75℃，DNA聚合酶从引物起合成互补链。 ?化学合成法（基因小、核酸序列已知） （3）将目的基因导入受体细胞 ?转化的概念： ?导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法， 基因枪法和 花粉管通道法等。 ?导入动物细胞：显微注射技术。 受体细胞多是 受精卵。 ?导入微生物细胞：Ca2+处理法 （4）目的基因的检测和表达 ?转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法DNA分子杂交技术。 ?目的基因是否转录出了mRNA，分子杂交技术. ?目的基因是否翻译成蛋白质， 抗原－抗体杂交。 有时还需进行个体生物学水平的鉴定。 如：是否出现抗虫，抗病性状。 5、基因工程的应用 植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用