微生物学与生物技术.pptVIP

1、 微生物的概念： 一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。 它们都是一些个体微小（一般 0.1mm）、构造简单的低等生物(单细胞或结构较为简单的多细胞生物、甚至没有细胞结构的生物)。 ;2、微生物类群 细胞型：原核：细菌、古生菌、放线菌、蓝细菌、支 原体、 立克次氏体 真核：真菌、显微藻类、原生动物 非细胞型：病毒、类病毒和朊病毒 细菌 ;3、微生物的特点;微生物的“生物界之最”;基因工程;基因操作的基本步骤;基因工程的别名;二、DNA重组技术的基本工具;1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶）;“分子手术刀”——限制性核酸内切酶;;;平末端：当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。;;限制性核酸内切酶; 1.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;2.“分子缝合针”——DNA连接酶;DNA连接酶根据来源不同分为两类：;A;DNA连接酶和 DNA聚合酶的异同：;3. “分子运输车” ——运载体;;大肠杆菌的质粒：;质粒的特点：;原核细胞的基因结构;启动子与终止子; RNA聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。它能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并与DNA分子的一条链为模板合成RNA。;真核细胞的基因结构;原核细胞与真核细胞的基因结构比较;基因的种类;基因工程的基本操作程序;一、目的基因的获取;基因文库的构建:;2.化学合成目的基因DNA片段;3.利用PCR技术合成DNA;;利用PCR技术扩增目的基因;4.mRNA反转录成cDNA;二、构建表达载体;基因工程载体的构建需要考虑哪些因素 ; 启动子 ： RNA聚合酶识别和结合的一段特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，RNA聚合酶与之结合才能驱动基因转录出mRNA，进而获得需要的蛋白质。 终止子 ：一段特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端，作用是使转录在所需要的地方停止。 标记基因 ：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 ;质粒;三、将目的基因导入受体细胞;2.导入大肠杆菌： 先用Ca2+处理成感受态后与溶有载体DNA的缓冲液混合,吸收DNA分子，完成转化。;3.农杆菌转化法（双子叶植物和裸子植物植物） 基因枪法（单子叶植物）和花粉管通道法; 基因枪法： 将直径4um的钨粉或金粉在供体DNA中浸泡，然后用基因枪将这些粒子打入细胞、组织或器官中，具有一次处理多个细胞的优点，但转化效率较低，另外这种方法也用于基因治疗和抗体制备，并已取得初步成效。 花粉管通道法：在授粉后向子房注射混合目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。 ;四、目的基因的检测与鉴定;（一）分子水平;DNA分子杂交示意图 ;2. 检测目的基因是否转录出了mRNA ;3. 检测目的基因是否翻译出蛋白质 ;（二）个体水平;