养殖大菱鲆细菌性红体病病原菌的分离与鉴定-海洋科学.PDFVIP

养殖大菱鲆细菌性红体病病原菌的分离与鉴定 1，2 2 2 3 4 董 丽 ，王印庚 ，张 正 ，曲江波 ，陈 霞 （1.中国海洋大学 生命学院，山东 青岛 266003 ；2.中国水产科学研究院 黄海水产研究所 青岛市海水鱼 类种子工程与生物技术重点实验室, 山东 青岛 266071；3.天源水产有限公司, 山东 烟台264000；4.青岛 九洋红水产科技有限公司，山东 青岛266071） 摘要：从患有红体病的养殖大菱鲆 （Scop hthalmus maximus ）的肌肉中分离得到一株优势菌并记为 H 1。 经人工注射感染证实H 1 即为引起养殖大菱鲆红体病的病原菌,其半致死量LD50 为2.82×105 CFU/mL，而低 浓度 （1.4 1×103 CFU/mL）没有造成死亡，但注射部位有脓肿现象，注射相同体积 1.5%无菌生理盐水的对 照组没有明显的症状，注射部位也无异常。革兰氏染色显示该菌为革兰氏阴性，菌体呈杆状，周生鞭毛。 综合该菌的形态、常规生理生化特征和API32E 鉴定结果，发现H 1 与迟钝爱德华氏菌的表性特征非常相 似，相似率达到99.9% 。在分子水平上对其16S RNA 基因序列的测定、同源性分析，结果表明H 1 与迟钝 爱德华氏菌的亲缘关系最近，相似度达到99%。综合上述研究结果，将该菌株初步鉴定为迟钝爱德华氏菌 (Edwardsiella tarda) 。 关键词：大菱鲆 （Scop hthalmus maximus ）；红体病；细菌鉴定；迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda) 中图分类号：S965 文献标识码：A 文章编号：1000-3096 （2009）07-0057-07 大菱鲆(Scop hthalmus maximus) 属于鲆科 病”鱼体的肌肉中分离出一株优势菌H 1，并根据电 (Bothidae) 、菱鲆属(Scop hthalmus), 自然分布于欧洲 镜下的形态特征、常规生理生化反应、API32E 自动 沿岸各主要海区,是欧洲水产品市场广受欢迎的一 鉴定系统鉴定结果以及 16SrRNA 基因序列同源性 [1] 种名贵鱼种,经济价值很高 。于 1992 年由中国水 分析鉴定该株菌为迟钝爱德华氏菌，现将结果报告 产科学研究院黄海水产研究所从英国引进到中国， 如下。 大菱鲆养殖业在北方沿海迅速兴起,成为第四次海 1 材料与方法 水养殖浪潮的支柱产业。目前大菱鲆养殖多数采用 [2] 1.1 材料 的是“温室大棚+深进海水”的养殖模式 ，但随着养 供试病大菱鲆来自文登市一养殖场，体长约10 cm；- 殖规模的快速增长,养殖密度的增加，水体环境的恶 [3] 人工感染用健康大菱鲆平均体长13 cm± 1 cm ，体质 化，疾病的流行也随之而来 。根据国内外有关大 菱鲆主要感染性疾病的报道，可以将其分为三大 量48 g±2 g，购自蓬莱天源水产有限公司。 类，即：细菌性疾病、病毒性疾病和寄生虫病。其 pMD 18-T 载体购自宝生物 （大连）有限公司， 中细菌性疾病是大菱鲆养殖中危害最为严重的一 [4~ 10] 收稿日期：2008-09-23；修回日期：2008-12-26 种疾病，给养殖产业带来了巨大的经济损失 。 基金项目：国家863计划资助项目 （2003AA622070）；国家“十一五”科 2007 年8~9 月份山东省文登市某养殖场体长10 cm 技支撑计划资助项目（2006BAD09