头孢克肟颗粒微生物限度检查的方法学验证.docVIP

精品论文 参考文献 头孢克肟颗粒微生物限度检查的方法学验证 刘佳 (广东省梅州市食品药品检验所 广东梅州 514000) 【摘要】目的 建立头孢克肟颗粒的微生物限度检查方法。方法 测定头孢克肟颗粒对5种试验菌株的回收率，并进行控制菌的检查。结果 5种试验菌株的回收率均高于70%以上，控制菌阳性生长良好。结论 通过试验证明该方法有效可行，可用于该品种的微生物限度检查。 【关键词】头孢克肟颗粒 微生物限度检查 回收率 【中图分类号】R927.11 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）32-0051-02 药品在生产、储存、流通等环节都可能受微生物污染，被污染药品对人体的生命安全存在极大的隐患，而采用合适的方法进行药品微生物检查，可准确地反映药品受污染的程度，并保证人民大众用药安全。头孢克肟为第三代口服头孢菌素，通过抑制细菌细胞壁合成而起杀菌作用，对多数beta;内酰胺酶稳定，许多产青霉素酶和头孢菌素酶菌株仍对本品敏感。近年来的研究表明，头孢克肟在治疗儿童上呼吸道感染，儿童急性化脓性中耳乳突炎，小儿细菌性肠炎有较好疗效。本试验的供试品溶液经低速离心处理后，拟采用薄膜过滤法及常规法进行头孢克肟颗粒的微生物限度检查，并根据《中国药典》2010年版验证试验要求进行方法学验证。 1 试验材料 1.1 仪器设备 蒸汽灭菌器（DSX-280KB24，上海申安医疗器械厂）；电热鼓风干燥箱[(GF-9030(A)，上海迈捷试验设备]；霉菌培养箱（MJX-150，上海申贤恒温设备厂）；生化培养箱（SPX-80，上海海向仪器设备厂）；离心机（TDZ6B-WS，上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；孔径为0.45mu;mplusmn;0.2mu;m醋酸纤维素滤膜（上海医药工业研究所，亚东分离器材厂）；STV2开放式薄膜过滤器（浙江宁海白石药检器厂）。 1.2 菌种 大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]和黑曲霉[CMCC(F)98003]，均由中国药品生物制品检定所提供。 1.3 培养基及试剂 营养琼脂培养基，玫瑰红琼脂培养基，营养肉汤培养基，蛋白胨（均由中国药品生物制品检定所监制），beta;-内酰胺酶（购于上海瑞齐生物科技有限公司）。 1.4 稀释剂 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨水、0.05%（v/v）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液均自配。 1.5 试药 头孢克肟颗粒A、B、C三个厂家，分别为深圳致君制药有限公司、湖南紫光古汉南岳制药有限公司、广州白云山制药总厂，批号分别为20120316、2120069（以下用数字1、2、3表示，规格50mg/袋。） 2 实验方法 2.1 菌液制备 接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤中，30～35℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1mL含50～100cfu的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml含50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物到改良马丁琼脂培养基斜面上，培养5～7d，加入5mL0.05%（v/v）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子菌液至灭菌试管内，用含0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将菌液稀释至每1ml含50～100cfu的菌悬液。 2.2 供试液制备 取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml置匀浆罐，制成1:10的溶液，将1:10的溶液离心5分钟（500转/分钟），上清液为1:10的供试液。 2.3 常规法 取1:10供试液1ml注入平皿内，平行制备两个，倾注冷却至45℃的相应琼脂培养基(细菌计数用培养基为营养琼脂，霉菌、酵母菌计数用培养基为玫瑰红钠琼脂培养基) 15～20mL，摇匀，凝固后，将平板倒置于规定的温度培养至规定的时间(细菌于30～35℃培养3d，霉菌、酵母菌于23～28℃培养5d)，做菌落计数。 2.5 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证 2.5.1 验证方法 （1）试验组 根据上述两种方法的差异，加入各种试验菌的方法不同。a.按常规法，取1:10供试液1ml注入平皿后，于每皿中加入50～100cfu试验菌，每种试验菌各平行制备两份。b.采用薄膜过滤法，各试验菌50～1