大肠埃希菌的微生物检验分析.docVIP

精品论文 参考文献 大肠埃希菌的微生物检验分析 陆春光 　　（黑龙江省中医药科学院 黑龙江哈尔滨市 150036） 　　【摘要】目的：探讨大肠埃希菌的微生物检验。方法：对大肠埃希菌采集培养及操作步骤进行分析。结果：大肠杆菌常引起各种肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌。结论：革兰阴性杆菌很多是条件致病菌，且有许多细菌对很多抗生素天然耐药。有些细菌是医院感染的常见细菌。 　　【关键词】大肠埃希菌；细菌检验；操作方法 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）16-0235-02 　　大肠埃希菌俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属的一个种。本菌是人类和动物肠道正常菌群的主要成员。每克粪便中约含109个大肠杆菌。因其广泛分布于自然界(水、土壤、食品、牛乳等)，故卫生学上将其作为卫生监督的指示菌。从对肠道的作用来看，可将其分为致病性与非致病性两大类[1]。其血清分群用O：K：H表示。O抗原(菌体抗原)迄今已有171种，是血清分型群的基础；K抗原(荚膜抗原)，有99种；H抗原(鞭毛抗原)有60种。一些血清型对肠道生理起着重要作用，另一些血清型能引起不同特征性腹泻和肠道外感染。主要致病的有肠致病性大肠杆菌、肠道聚集一粘附性大肠杆菌、产肠毒素性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌，兼性厌氧。现对大肠埃希菌操作分析如下。 　　1.大肠埃希菌主要特征 　　1.1 形态特征 　　大肠埃希菌大小为1.1～1.4mu;mtimes;2.0～6.0mu;m(活菌)或0.4～0.7mu;mtimes;1.0～3.0mu;m(干菌和染色菌)，多数有周身鞭毛，能运动，周身还有菌毛，无芽孢，某些菌株有包膜，单个存在，少数成对。 　　1.2 培养特征 　　最适生长温度为37℃，pH为7.4～7.6，普通培养液上生长良好，形成直径2～3mm、圆形、凸起、湿润、光滑、灰白色、半透明、边缘整齐的菌落。在血琼脂平板上，某些菌株可产生beta;-溶血环。在伊红-亚甲蓝琼脂平板上，菌落呈蓝紫色，在中国蓝琼脂平板上为蓝色。在SS琼脂平板上多数被抑制，生长菌落为红色，在营养肉汤内均匀浑浊生长。 　　2.检查方法 　　2.1 普通大肠埃希菌检查 　　2.1.1标本采集 以无菌操作采取血液、脑脊液、尿液、胆汁、脓液、痰及分泌物、水等。 　　2.1.2分离培养 血液标本先接种于肉浸汤内增菌后(细菌生长，肉汤浑浊)，移种血琼脂平板和伊红-亚甲蓝琼脂平板上。 体液标本取离心沉淀物，脓液、痰、分泌物等直接划线接种于以上培养液上，35～37℃培养18～24h后，观察菌落形态。尿液除做分离培养外，尚需同时做尿中细菌总数测定。 　　2.1.3菌种鉴定 初步鉴定根据菌落形态涂片染色并做氧化酶、触酶、硝酸盐等生化反应。可初步定为大肠埃希菌[2]。最简便的方法是采用肠杆菌科试剂盒，根据反应结果编码后作出最后鉴定。 　　2.2肠道感染细菌学检查 引起肠道感染(腹泻)的大肠埃希菌主要有三组：产毒素型大肠杆菌、肠致病性大肠埃希菌及肠侵袭性大肠埃希菌。它们的生物学特性与普通大肠杆菌相同，但具有特殊的血清型或肠毒素。 　　2.2.1不耐热肠毒素(LT)检测 　　2.2.1.1兔肠段结扎法 用2kg左右的健康家兔，禁食2d后麻醉剖腹取出小肠，自回肠末端开始结扎，每段5cm共6段，其中一段为阳性对照，另一段为阴性对照，余4段注入试验菌的肠毒素液(培养的上清液)1ml，然后将小肠放回原处，缝合腹壁，24h后计算每厘米肠段中肠液蓄存量，如阴性对照肠段未见肠内有液体，阳性对照肠内充满液体(可达2ml/cm3)，实验肠段液体ge;1ml/cm3者为阳性反应，表示被检菌能产生LT。 　　2.2.1.2皮肤毛细血管通透性亢进试验 将兔背部或豚鼠腹部剃毛后，皮内注射被检菌培养上清液0.1ml，24h后，耳静脉内注射伊文蓝液(50g/L的色素溶于4.5g/L的NaCl溶液中)，每kg体重注入1.2ml，1h后，量取注射部位蓝色斑的直径。测量时再根据蓝色斑的深浅分成1～8度，判定结果，以蓝色斑的深浅度乘以蓝色斑的直径值表示之。 　　2.2.1.3琼脂扩散法(Elek法) 取已分纯并鉴定为大肠埃希菌者移种于艾立克琼脂平板上，均匀涂布呈椭圆形，35℃培养48h后，将浸有2万U/ml的多黏菌素纸片贴于菌落上，35℃培养5～6h后，在中心离菌苔4～5mm处开约直径4mm孔，放入已提纯并已稀释的LT抗血清20～30ml。同时在各菌苔外缘挑取7mm直径的琼脂块各4个，浸泡于0.5ml pH 7.0，0.01mol/LPBS中，放冰箱过夜用ST测定[3]。然后将平板置35℃培养15～20h，观察