微生物学检验弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验.ppt

弯曲菌属 弯曲菌属是一类呈逗点状或S形的革兰阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物和人类腹泻、胃肠炎和肠道外感染。 形态染色 革兰阴性菌，螺旋形、S形，一端或两端有单鞭毛，无芽孢，无荚膜，运动活泼，暗视野下呈投标样运动， 培养特性 微需氧 最适生长温度随菌种而定 营养要求高，常用改良弯曲菌培养基（Campy-BAP） 两种类型菌落：扁平湿润边缘不整齐，沿穿刺线扩散生长；圆形、突起、湿润、黏液样外观 生化反应 氧化酶阳性 触酶阳性 不分解和不发酵糖 不分解尿素 临床意义 传播方式：经口感染 致病物质：产生肠毒素、细胞毒素、内毒素等致病物质 空肠弯曲菌可引起急性肠炎、格林巴利综合征 胎儿弯曲菌可引起败血症、脑膜炎等 弯曲菌属检验 标本采集：粪便，肛拭，剩余食物，立即送检 镜检： 悬滴法动力检查观察投标样或螺旋动力 染色检查：革兰阴性细小弯曲菌 培养：微需氧、温度 鉴定 动力 形态 菌落 马尿酸钠水解试验（空肠弯曲菌阳性） 醋酸吲哚水解试验（空肠弯曲菌阳性） 不同温度的生长实验 幽门螺杆菌 螺杆菌是一群氧化酶和触酶阳性，微需氧、37℃能生长，在25 ℃和42 ℃生长不良的革兰阴性弯曲菌 目前研究的最多的是幽门螺杆菌（Hp） 形态染色 革兰阴性 螺旋状弯曲，在胃粘膜环境中，具有典型的形态，在陈旧培养物中，可呈圆球状 单端或双端有多根带鞘鞭毛 无芽孢 培养特性和生化反应 微需氧，营养要求高，需动物血液或血清。 37℃能生长，在25 ℃和42 ℃生长不良 过氧化氢酶和氧化酶阳性。尿素酶丰富，是鉴定的主要依据之一。 临床意义 致病物质：黏附作用，尿素酶，蛋白酶，细胞毒素等 与人类慢性胃炎、消化道溃疡有密切关系 微生物学检验 标本采集：胃、十二指肠粘膜标本 显微镜检查： 直接镜检 活检标本革兰染色 组织学切片染色检查 分离培养 快速脲酶试验:5~30钟内观察结果 PCR法 弯曲菌属温度生长试验 非发酵菌 是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌 非发酵菌主要种类 铜绿假单胞菌 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属 金氏杆菌属 土壤杆菌属等 非发酵菌主要特点 氧化酶：＋；不动杆菌属除外 O/F试验：O/－ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力试验不明显，常采用镜检或鞭毛染色 肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别 假单胞菌属 假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性分为5群，其中Ⅰ群属于假单胞菌属，共7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 多为条件致病菌，是医院感染的主要病原菌 假单胞菌属共同点 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭毛 专性需氧 营养要求不高 氧化酶：＋ O/F：O Mac生长：＋ 产生水溶性色素 铜绿假单胞菌－－形态染色 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛鞭毛 铜绿假单胞菌－－培养特性 专性需氧、营养要求不高 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，培养物呈蓝绿色。 培养物有生姜气味 铜绿假单胞菌－－菌落特征 典型菌落：扁平湿润，边缘不规则，菌落和培养基灰绿色，表面有金属光泽 大肠菌样菌落：菌落圆形凸起，似大肠杆菌 黏液型菌落：菌落凸起，呈粘液状 侏儒型菌落：细小，无光泽 在血平板上形成透明溶血环 在SS、Mac上形成不发酵乳糖菌落 铜绿假单胞菌－－生化反应 氧化酶＋ O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋ 铜绿假单胞菌－－抗原结构和抵抗力 抗原结构 O抗原：包括外膜蛋白和脂多糖 H抗原 S抗原 抵抗力： 对外界环境抵抗力强 对多种抗生素不敏感 铜绿假单胞菌－－临床意义 致病物质：内毒素、外毒素、胞外酶、菌毛、荚膜 所致疾病 条件致病菌 医院感染的重要病原菌 大面积烧伤创面感染的重要病原菌 铜绿假单胞菌－－检验程序 铜绿假单胞菌－－检验方法 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜检；鞭毛染色镜检 培养：标本接种血平板、Mac平板分离培养，血标本先增菌，再转种 鉴定： 初步鉴定：菌落特征、水溶性绿色色素、生姜气味、氧化酶、O/F 全面鉴定：色素不典型者需全面鉴定 铜绿假单胞菌－－分型检查 血清学分型 噬菌体分型 质粒指纹图谱分析 脉冲场凝胶电泳 分型检查意义：对医院感染的流行病学调查有重要意义 荧光假单胞菌 革兰阴性杆菌，单端丛鞭毛 专性需氧 营养要求不高，普通平板、Mac平板可生长 最适生长温度25～30℃，4℃生长，35℃、42℃不生长 产生水溶性荧光素（青脓素），不产绿脓素 氧化酶＋； O/F：O；卵磷脂酶＋；明胶液化＋ 具有嗜冷性，可在冰箱储存血中繁殖 恶臭假单胞菌 革兰阴性杆菌，单端丛鞭毛 专性需氧 最适生长温度25～30℃，4℃