MALDI_TOF质谱技术及Biotyper数据库在养殖场空气微生物鉴定中的应用.docxVIP

中 国 兽 医 学 报 ２０１４年１２月 第３４卷 第１２期 ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉ Ｄｅｃ． ２０１４ Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．１２２０３１ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱技术及 Ｂｉｏｔｙｐｅｒ数据库在养殖场空气微生物鉴定中的 应用李楠，刘文森，刘林娜，郝镯，李树民，孟轲音，何扬，万忠海，王承宇＊ ，李吉平＊（军 事医学科学院 军事兽医研究 所／吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室 ，吉 林 长春 １３０１２２）摘要 ：以 １６ＳｒＲＮＡ 测序法为标准方法 ，利 用 ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ 质谱技术及 Ｂｉｏｔｙｐｅｒ数 据库对某猪 场 ２１０ 株 空 气 分 离 株 进行鉴定及准确率分析。结 果 显 示 ９１．０％ 的菌株被准确 鉴 定 到 种 水 平 ，９５．７％ 被准确鉴定到属水平。 研 究 表 明 ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ 质谱技术可以快速准确检测空气微生物 ，为养殖场环境质量监测提供了新的技术支持 。关键词 ：空 气微生物 ；ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ 质谱技术 ；Ｂｉｏｔｙｐｅｒ数 据库中图分类号 ：Ｓ８５２．６１文献标志码 ：Ａ文章编号 ：１００５－４５４５（２０１４）１２－２０３１－０４ＴｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳａｎｄｂｉｏｔｙｐｅｒｄａｔａｂａｓｅｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆｆａｒｍａｉｒｂｏｒｎｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓＬＩＮａｎ，ＬＩＵ Ｗｅｎ－ｓｅｎ，ＬＩＵ Ｌｉｎ－ｎａ，ＨＡＯ Ｚｈｕｏ，ＬＩＳｈｕ－ｍｉｎ，ＭＥＮＧ Ｋｅ－ｙｉｎ，ＨＥ Ｙａｎｇ，ＷＡＮ Ｚｈｏｎｇ－ ｈａｉ，ＷＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ－ｙｕ＊ ，ＬＩＪｉ－ｐｉｎｇ＊ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＪｉｌｉｎＰｒｏｖｉｎｃｅｆｏｒＺｏｏｎｏｓｉｓＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３０１２２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｔｏｔａｌｏｆ２１０ａｉｒｂｏｒｎｅｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｌｏｎｉｅｓ ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ ａｓｗｉｎｅｈｏｕｓｅ，ＭＡＬＤＩ－ ＴＯＦ ＭＳ－ｂａｓｅｄＢｉｏｔｙｐｅｒｄａｔａｂａｓｅ ｗｅｒｅｕｓｄｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙａｎｄｅｖａｌｕａｔｅｄｆｏｒａｃｃｕｒａｃｙ，１６ＳｒＲＮＡ ｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｗａｓｓｅｒｖｅｄａｓｔｈｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ９１．０％ ａｎｄ９５．７％ ｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｃｏｒｒｅｃｔｌｙｔｏｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓｌｅｖｅｌａｎｄｇｅｎｕｓｌｅｖｅｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｔｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈａｔＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳｃａｎｄｅｔｅｃｔａｉｒｂｏｒｎｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｒａｐｉｄｌｙａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｌｙ，ｗｈｉｃｈｏｆｆｅｒｅｓａ ｎｅｗｔｅｃｈｎｉｃａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒｆａｒｍｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｑｕａｌｉｔｙｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｉｒｂｏｒｎｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ；ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｂｉｏｔｙｐｅｒｄａｔａｂａｓｅ＊ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｐｉｎｇｌｉ１９６４＠１２６．ｃｏｍ；１７３３０６５４１＠ｑｑ．ｃｏｍ近年来随着集约化、规模化畜禽产业的 发展 ，动 物养殖密度增高，饲养空间相对狭窄，致使由 动物活 动、粪 便、毛 皮、饲 料产生的各类微生物 （如 禽流感、 鸡新城疫病 毒、ＳＡＲＳ 病 毒、结 核 分 枝 杆 菌 等 ）在 空 气中聚集并迅速传播，不仅造成环境污染，而 且严重危害了动物和饲养人员的身体健康 ，甚 至可引起某 些传染病的暴发流行［１］。因此研究空气中 微生物的 种类对养殖环境的监测具有重要意义 ，如何 快速、准 确地检测空气微生物则成为研究重点。目前空气微生物的检测方法主要基于形态学及生化反应，这些 传统方法能将环境分离株鉴定到属 水平，但 对 于 种 水 平 的 鉴定缺乏准确 性［２－４］。１６Ｓ ｒＲＮＡ 测序法是目 前 公 认 的 “金 标 准 ”方 法，但 其 昂 贵的测序成本和繁琐的操作程序令许多实验室望而 生畏，不利于微生物的快速检测 。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 （ｍａｔｒｉｘ－ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ－ｏｆ－ｆｌｉｇｈｔ ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ）是 ２０ 世 纪 ８０年代出现的生物质谱 技术 ，该 技术凭