10-液相色谱串联质谱联用技术-实验指导(许煊炜).docVIP

液相色谱串联质谱联用仪检测技术 实 验 指 导 吉林农业大学 农业部参茸质检中心 2017.03 实验一 AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱 液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用 一 .实验目的和意义 通过学习液质联用仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生使用液质联用仪进行仪器分析的能力，并培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。 （一）检测仪器 1、 仪器名称 高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。型号：4500 QTRAP（美国Applied Biosystems公司）。 2、 仪器组成 液相色谱部分：岛津 LC-30A，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器； 串联质谱部分： QTRAP4500，配有ESI离子源、串联四级杆/线性离子阱。 3、 主要性能指标 离子化方式：ESI电离 质量范围：（5 ~ 1700）amu 分辨率： 6900 质量稳定性：0.1 amu/12h 灵敏度：1pg reserpine, ESI+, MRM扫描（m/z : 609/195），信噪比S/N 120:1 扫描速度：4000 amu/sec 质量准确度： 0.01%（全质量数范围） 4、 方法原理 高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。在离子源中，各组分以ESI或APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。 4500QTRAP的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成。Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。 4500QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。整台仪器的控制、数据采集、数据处理、结果输出均由PC计算机Windows操作系统支持下的Analyst软件控制完成。 （二）样品 1、样品要求 本仪器适合分子量在5 ~ 1700 amu范围内的有机样品的定性及定量分析。待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。若样品或配制的样品溶液发生沉淀、挥发、变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。 2、试剂要求 所有的试剂均选用色谱纯级，所用水的电导率应大于18KΩ。流动相必须用0.2μm或0.45μm滤膜过滤后方可使用。 3、分离条件要求 在液相色谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐，如磷酸盐。 （三）、操作步骤 实施检测操作的人员，必须熟悉该仪器的操作规程，仪器的工作状态、包括检测灵敏度和分辨率，必须满足检测项目的要求。 1、 开机前准备 开机前应检查仪器室内电、气的供应情况及空调机的工作状态是否稳定，检查真空机械泵泵油是否需要更换。只有当UPS工作正常，Gas1/Gas2、Curtain Gas和Exhaust Gas的压力分别稳定在0.35、0.35和0.7 Mpa，环境温度为10~30℃，相对湿度小于70%时才能开机。 2、开机 1) 打开真空机械泵上的电源开关。 2) 真空机械泵继续工作至少15分钟后，打开MS电源主开关。 3) 等真空度达到2×10-5Torr（绿色指示灯不闪）后，打开PC计算机电源 3、仪器调谐 （四）、方法建立 1.在Analyst软件Tools菜单中选择Project→Create Project。在Project name项下输入新建的Project名称。注意，不要点选窗口中的其他按钮！点击OK，确认新建Project。 2.在Analyst软件界面下，双击导航栏内Hardware Configuration。在弹出窗口中选择MassOnly，点击Activate Profile，激活MassOnly（只联接质谱主机）。 3.在导航栏内单击Tune and Calibrate，进入调谐模式。点击上方工具条中的T钮。此时，应注意到主机有“扑