工业微生物培养与检测技术.pptVIP

项目三 工业微生物培养与检测技术 1.显微镜直接计数 是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 血球计数板：菌体较大的酵母菌或霉菌孢子 细菌计数板：一般细菌 用途：适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液的计数 缺点：不易区分颗粒、死菌体和杂菌。 （1）血球计数板法 计数方法 适用范围：细胞个体形态较大的单细胞（酵母、血细胞等） 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。 （2）涂片染色法（适于细菌计数） 分光光度计法 制作培养基并对培养基灭菌 配制样品稀释液 接种（两种方法） 涂布平板法：倒平板 接种0.1mL 涂布 混合平板法：接种1mL 混匀 培养：室温下培养形成单菌落 查菌落数并计算 菌落数 菌体数/mL= ×菌液稀释倍数 接种量 如某一细菌在稀释法中的生长情况如下； ??? 稀释度???????? 10-3??10-4??10-5???10-6? 10-7? 10-8 ??? 重复数?????????? 5????? 5????? 5????? 5????? 5???? 5 ??? 出现生长的管数?? 5?? ???5????? 5????? 4????? 1???? 0 ??? 根据以上结果，在接种10-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种10-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。 由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。那么，1ml原菌液中的活菌数＝17×100 000 = 17×105。即每毫升原菌液含活菌数为l700000个。 本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量。 缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。 二、 pH 值对微生物生长的影响 微生物在 pH4~9 之间都可以生长。 同一种微生物在其不同的生长阶段和不同的生理生化过程中，对pH值的要求也不同。 四、水分与空气相对湿度 在自然条件下，微生物喜欢生长在湿润的物质表面和潮湿的环境中。 配制培养基时加入足够量的水分，同时在培养微生物时，还要求有适宜空氧湿度。大多数微生物生长适宜的空气湿度为80%～90%。空气湿度低，影响微生物生长。 渗透压是影响水分利用的重要因素。 在低渗溶液中：水分向细胞内渗透， 细胞吸水膨胀。 在等渗溶液中：细胞保持原形， 微生物生长最好。 在高渗溶液中：细胞失水，造成生理干燥， 引起质壁分离，抑制微生物生长 五、光与射线 红外线波长在800-1000nm，对微生物作用不大，主要是照射后产热，间接影响微生物生长。 可见光波长在400-760nm，是光能营养型微生物的能源。大部分微生物生长不需要，但有些化能营养型微生物在不同生长阶段需要一定量的散射光照。 紫外线及其他射线具有较强的杀菌作用。 四、分批培养和连续培养 （一）、分批培养： 以少量纯培养细菌接种一定容积的培养基中经过培养生长，最后一次收获，此称分批培养。 （二）、连续培养： 在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。 3.特点：基质过量，微生物始终以最高速率进行生长，并可在允许范围内控制不同的菌体密度；但工艺复杂，烦琐。 优点：缩短发酵周期；便于自动控制；产物质