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LC/MS导论 仪器参数 仪器用途 LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。 MS是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的信息，作为理想的色谱检测器，不仅特异性强，而且具有极高的检测灵敏度。自1983年McLaffeny等 开发串联质谱技术(MS／MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质谱已成为一种成熟的技术，在许多领域发挥了巨大作用。串联质谱法是指质量分离的质谱检测技术，在单极质谱给出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多级裂解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物，对目标化合物进行定量等，有分离、结构解析同步完成的特点，能直接分析混合物组分，有高度的选择性和可靠性，其检测水平可以达到pg级 LC/MS 分析流程示意图 离子源（ION Source） 大气压电离 (API) 离子化过程发生在大气压下 (与在真空下的电离有本质的不同,例如,EI－电子轰击离子源) API（大气压电离）技术包括： ESI -电喷雾离子源 APCI - 大气压化学电离源 大气压电离(API)原理基础 大气压电离原理简介 电喷雾(Electrospray,ESI) (1)机理 (2)影响被分析物响应的因素 (3)多电荷离子 大气压化学电离(APcI) 大气压电离 (API) 技术 ESI 和APCI 共同点: 使用高电压元件和充气喷雾法产生气相离子 通常产生 (M+H)+ 或 (M-H)- 等准分子离子 产生极少的碎片，但可以控制产生结构碎片 非常灵敏的技术 大气压电离 (API) 技术 一般而言,ESI 和 APCI 不同点: (1) 生成离子方式不同 ? ESI - 液相离子化 ? APCI - 气相离子化 (2)样品兼容性 ? ESI - 极性化合物和生物大分子 ? APCI - 非极性, 小分子化合物 (相对于用 ESI电离的化合物而言) 且有一定的挥发性 (3)流速兼容性 ? ESI - 0.001 到 1 mL/min ? APCI - 0.2 到 2 mL/min 电喷雾离子源 电喷雾离子化分为三个过程: 形成带电小液滴 溶剂蒸发和小液滴碎裂 最终形成气相离子 影响化合物 ESI电离的因素 化合物的浓度 基质的性质 化合物的表面活性 流速 流速对API的影响 大气压化学电离（atmospheric pressure chemical ionization APCI) 质量分析器 质量分析器 扫描类型选择 全扫描(Full Scan) 子离子扫描(Daughter Scan) 母离子扫描(Parent Scan) 中性碎片丢失扫描(Constant Neutral Loss Scan) 选择离子监测(SIR) 多反应监测(MRM) 全扫描用于检测离子源产生的离子流中，各种离子的m/z和强度。从全扫描得到的信息可以知道目前样品中的组分状态。 全扫描模式下三重四极杆只有一把四极杆发挥了功能，相当于单击四极杆的能力。这种模式仅仅是为了对样品有个初步的了解。挑选需要进一步分析的离子 子离子扫描，pruduct ion scan 子离子扫描可以得到母离子的碎片信息。这些信息可以帮助操作者了解母离子的结构信息，区别几种m/z相同的母离子，降低假阳性率。子离子扫描的作用是： 通过母离子碎片种类和强度的差异来区别m/z相同的母离子 了解母离子的结构 水飞蓟宁（上图）ESI-MS和ESI-MS-MS检测结果显示，在负模式下的全扫描模式下的分子离子峰[M-H]-质荷比为481；二级质谱的碎片离子峰质荷比分别为：463，453，301，179，151，152，125。可知该化合物的分子量为482，化学结构中可能含有二氢黄酮醇基团。 母离子扫描，parent ion scan 中性丢失扫描，neutrual loss scan 多反应监测（MRM） MRM(Multi-reactiion monitoring)是三重四极杆最强大的功能了！其他仪器的性能无法和三重四极杆MRM的选择性和高定量精度相比。这里的“反应”指的是通过Q1选择了母离子在Q2碰撞室内碎裂成碎片的过程。一种母离子变成碎片就包含了多个反应： 化学反应：A=a+b+c通过Q1选择A，Q2碎裂A变为a、b、c，Q3测量a或b或c的强度，就可以知道A=a+b+c这一化学反应的强度，间接知道反应物A的强度。据此可以对A进行定量。 由于通过Q1和Q2两重选择，可以限定母离子m/z和子离子m/z两个参数；而SIM只能固定一个m/z。母离子和子离子m/z相同的情况，大多属于具有同分异