非结构蛋白NS1ELISA检测禽流感野毒感染抗体.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11欢学术研讨会 表2单克隆抗体亚类检测结果 ● 单抗名称 IA3 IB3 IC4 IF7 重链类型 lgG2a IgGl lgGl lgG2a 轻链类型 K K K 2．4单克隆抗体的交叉反应性 ’ 四种单克隆抗体均能与H7砸型禽流感病毒标准抗原反应，而不与H5和H9亚型禽流感病毒标准抗原反 应，表明制备的4种单克隆抗体为抗H7亚型禽流感病毒的特异性抗体。 3讨论 本研究用杂交瘤技术成功研制出抗禽流感H7亚型病毒的单克隆抗体，特异性试验结果证明，所研制的4 株单克隆抗体是抗禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体，且具有很好的亚型特异性。在鉴定试验中 通过血凝和间接免疫荧光分析表明所获得的单克隆抗体能鉴定区分部分毒株亚型，但不能完全鉴定区分所 有毒株，这可能是与该单克隆抗体的滴度及单克隆抗体识别的抗原表位有关，相关单克隆抗体针对的抗原 表位正在研究中。 禽流感的控制关键在于建立快速诊断禽流感病毒的方法。目前，诊断方法有病毒分离鉴定、RT—PCR笛， 但病毒分离由于试验周期长缺点，雉以胜任对高致病性禽流感快速诊断的需要：而RT-PCR方法虽然灵敏， 也由于多种囚素干扰，不能作为唯一判定依据。因此，建立快速诊断高致病性禽流感的方法迫在眉睫。本研 究所获得的针对禽流感H7亚型血凝素特异性的单克隆抗体为禽流感的诊断提供了高质量的试剂，有利于 H7亚型禽流感病毒快速准确检测方法的建立，目前有关应用该单克隆抗体建立快速检测病原方法正在进 行之中，初步试验显示出良好的效果。该成果将在进出口检疫，禽流感的检测监控上具有良好的推广和应 用前景。 非结构蛋白NSl—ELISA检测禽流感野毒感染抗体 王泽霖李建丽陈少渠马仲彬 (河南农业大学禽病研究所 郑州450002) 可作为一种鉴别诊断标记，但不能区分弧型，具有A型特异性。NSl．ELISA方法的初步应用，不仅为生产 提供了一种快速、特异、敏感的鉴别诊断方法，为进一步组装成试弃q盒奠定了基础，也为禽流感的早期诊 断，适时监控和净化提供了行之有效的方法。 关键词：AIV；H5N2亚型；RT-PCR；NSl基因：表达；间接ELISA 675 家禽传染病 关于禽流感的控制和消灭国外采用淘汰和扑杀阳性禽群．不主张使用疫苗，但随着禽流感防制难度的 增加，国外部分国家也建议使_Hj疫苗免疫来控制AI的流行和发生。我国对高致病性禽流感主要采用疫苗 免疫和扑杀相结合的措施，对低致病性禽流感主要采用疫苗免疫的方法。疫苗免疫虽然在一定程度上能减 少死亡，但不能完全抗感染，因免疫程序不当、漏免、疫苗质量等原因，造成免疫后抗体水平不高．导致 温和性和隐性感染禽群增加．继续带毒排毒，给禽流感的消灭带来更大的困难。另外，由于疫苗的广泛使 用，无法区分野毒感染和疫苗免疫的禽群，这不仅干扰禽流感的诊断，掩盖了禽流感的流行．增加AI防 制的难度。而且还严重影响到贸易出口．因此，生产中迫切需要建立一种特异、敏感的鉴别诊断方法来区 分野毒感染和疫苗免疫，做到对感染禽群早发现、早诊断、早消灭，从而更好控制AI的发生和流行。 答中具有重要作用。Skehel…进一步研究表明，NS，蛋白在病毒复制的早期就大量表达，仅出现于病毒感染 的细胞内。且能诱导机体产生针对NSl蛋白的抗体，这提示我们，NSl蛋白可作为一种鉴别诊断标志，通 毒感染禽群。 本实验参照有关文献，利用RT-PCR技术获得A型流感的NS、基因并克隆，构建了重组表达载体，且 在大肠杆菌中诱导表达了NSl蛋白，并以此为诊断抗原，建立可区分灭活疫苗免疫鸡群和野毒感染鸡群的 问接ELISA，旨在