甘蔗宿根矮化病菌实时荧光定量pcr检测方法的建立-植物病理学报.pdfVIP

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2017-11-24 发布于天津
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甘蔗宿根矮化病菌实时荧光定量pcr检测方法的建立-植物病理学报.pdf

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植物病理学报ＡＣＴＡＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡＳＩＮＩＣＡ　４５(３):２３２￣２３８(２０１５) ｄｏｉ:１０.１３９２６/ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０３.００２甘蔗宿根矮化病菌实时荧光定量ＰＣＲ检测方法的建立王恒波ꎬ陈平华ꎬ高三基ꎬ郭晋隆ꎬ陈如凯∗ (福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室ꎬ福州３５０００２) 摘要:甘蔗宿根矮化病是由Ｌｅｉｆｓｏｎｉａｘｙｌｉｓｕｂｓｐ.ｘｙｌｉ (Ｌｘｘ)引起的一种世界性甘蔗细菌病害ꎮ 根据Ｌｘｘ的Ｐａｔ１基因保守序列ꎬ设计并合成了一对特异性引物Ｐａｔ１Ｆ (５′￣ＧＧＴＴＣＣＡＴＴＧＣＴＴＡＣＣＧＡＴＴ￣３′)/ Ｐａｔ１Ｒ(５′￣ＣＡＡＧＴＴＴＣＧＡＣＡＧＧＡＡＣＡＧＣ￣３′)ꎬ和一条ＴａｑＭａｎ探针(ＦＡＭ￣５′￣ＣＣＡＣＧＧＣＴＡＣＧＴＣＡＡＴＴＣＧＧＧ￣３′￣ＴＡＭＲＡ)ꎬ建立了一种特异性强、灵敏度高的甘蔗宿根矮化病菌实时荧光定量ＰＣＲ检测方法ꎮ 结果表明ꎬ本研究建立的实时荧光定量ＰＣＲ方法ꎬ对Ｌｘｘ的检测最低下限为２￣１１０ｃｏｐｉｅｓ μＬ ꎮ 应用实时荧光定量ＰＣＲ与常规ＰＣＲ方法对１４个甘蔗品种进行Ｌｘｘ检测ꎬ阳性检出率分别为８６％和４３％ꎬ表明实时荧光定量ＰＣＲ比常规ＰＣＲ检测方法具有更高的灵敏度ꎮ 研究结果为甘蔗宿根矮化病的诊断、田间发生动态监测、脱毒健康种苗检测及品种/ 材料交换检疫检测提供了新技术支撑ꎮ 关键词:甘蔗ꎻ宿根矮化病菌ꎻ实时荧光定量ＰＣＲꎻ检测Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｓｓａｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｅｉ￣ｆｓｏｎｉａｘｙｌｉｓｕｂｓｐ.ｘｙｌｉｉｎｓｕｇａｒｃａｎｅ　ＷＡＮＧＨｅｎｇ￣ｂｏꎬＣＨＥＮＰｉｎｇ￣ｈｕａꎬＧＡＯＳａｎ￣ｊｉꎬＧＵＯＪｉｎ￣ｌｏｎｇꎬＣＨＥＮＲｕ￣ｋａｉ　 (ＫｅｙＬａｂｏｆＳｕｇａｒｃａｎｅＧｅｎｅｔｉｃｓＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＦｕｊｉａｎꎬＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＦｕｚｈｏｕ３５０００２ꎬＣｈｉｎａ ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｌｅｉｆｓｏｎｉａｘｙｌｉｓｕｂｓｐ. ｘｙｌｉ (Ｌｘｘ) ｉｓｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｃａｕｓｉｎｇｒａｔｏｏｎｓｔｕｎｔｉｎｇｄｉｓｅａｓｅｏｆｓｕｇａｒｃａｎｅａｎｄｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎａｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃａｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ. ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬａＴａｑＭａｎｐｒｏｂｅａｎｄａｐａｉｒｏｆｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＰａｔ１ｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＬｘｘｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｘｘｗｉｔｈｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰＣＲ (ＲＴ￣ｑＰＣＲ)ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｏｎｌｙＬｘｘｐｒｏｄｕｃｅｄｔｙｐｉｃａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｃｕｒｖｅａｎｄｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍ２￣１ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆＲＴ￣ｑＰＣＲｗａｓ１０ｃｏｐｉｅｓ μＬ . ＦｏｕｒｔｅｅｎｓｕｇａｒｃａｎｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｆｒｏｍＮａｔｉｏｎａｌＲｅｇｉｏｎａｌＴｅｓｔｗｅｒｅｔｈｅｎｕｓｅｄｆｏｒＬｘｘｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｓｓａｙｂｙＲＴ￣ｑＰＣＲａｎｄｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌＰＣＲꎬａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｅｖｅｌｉｎｔｈｅｓｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅ８６％ａｎｄ４３％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈｅｈｉｇｈｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＲＴ￣ｑＰＣＲｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｘｘ.ＴｈｅｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓｒａｐｉｄꎬｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆＲＳＤꎬａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇｑｕａｒａｎｔｉｎｅ. Ｋｅｙｗｏｒ