甘蓝型油菜bnple2基因克隆及转基因拟南芥过表达分析.pdfVIP

中国油料作物学报 ２０１６，３８（３）：２７３－２８０ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１６．０３．００１ 甘蓝型油菜ＢｎＰＬＥ２基因克隆及转基因拟南芥过表达分析  叶　姜，詹杰鹏 ，师家勤，王新发，刘贵华，王汉中 （中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，湖北 武汉，４３００６２） 　　摘要：为研究油菜中二氢硫辛酸乙酰转移酶（Ｅ２）基因的功能，利用甘蓝型油菜品种中双１１号参考序列设计 引物，克隆Ｅ２基因的ＣＤＳ序列，命名为ＢｎＰＬＥ２，序列全长１５０３ｂｐ，由６个外显子构成，编码５００个氨基酸残基，预 测蛋白相对分子质量为２５．１７ｋＤ，等电点为９．０４。ＢｎＰＬＥ２氨基酸序列高度保守，与拟南芥ＡｔｐｌＥ２相似性最高。构 建ＢｎＰＬＥ２超表达载体ｐ３５Ｓ：：ＢｎＰＬＥ２转化拟南芥哥伦比亚生态型。转基因拟南芥后代表现出花序簇状分布，花 蕾排列紧密呈菊花状。主花序顶端优势消失，侧枝生长发达，果荚畸形，柱头突出。 关键词：甘蓝型油菜；ＢｎＰＬＥ２基因；克隆；过量表达；株型 中图分类号：Ｓ５６５．４０３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１６）０３－０２７３－０８ ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＢｎＰＬＥ２ｆｒｏｍＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ａｎｄｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ＹＥＪｉａｎｇ，ＺＨＡＮＪｉｅ－ｐｅｎｇ，ＳＨＩＪｉａ－ｑｉｎ，ＷＡＮＧＸｉｎ－ｆａ，ＬＩＵＧｕｉ－ｈｕａ，ＷＡＮＧＨａｎ－ｚｈｏｎｇ （ＯｉｌＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄ ＧｅｎｅｔｉｃＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＯｉｌＣｒｏｐｓ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｂｅｔｔｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｄｉｈｙｄｒｏｌｉｐｏａｍｉｄｅａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（Ｅ２）ｇｅｎｅｉｎｒａｐｅｓｅｅｄ （ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．），ＣＤＳｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＥ２ｇｅｎｅｆｒｏｍＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ｃｖＺｈｏｎｇｓｈｕａｎｇ１１（ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓ ＢｎＰＬＥ２）ｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ．ＢｎＰＬＥ２ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈｓｅｑｕｅｎｃｅ（１５０３ｂｐ）ｉｎｃｌｕｄ ｅｄ６ｅｘｏｎｓｅｎｃｏｄｉｎｇ５００ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｉｔｈａｐｒｅｄｉｃｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆ２５．１７ｋＤａｎｄｐＩ９．０４．Ｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｏｆ ＢｎＰＬＥ２ｗｅｒｅｈｉｇｈｌｙｃｏｎｓｅｒｖｅｄ．ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＢｎＰＬＥ２ｐｒｏｔｅｉｎｓｈｏｗｅｄｈｉｇｈｅｓｔｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｗｉｔｈ ＡｔｐｌＥ２ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｎｓｔｒｕｃｔｐ３５Ｓ：：ＢｎＰＬＥ２ｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ Ｃｏｌｕｍｂｉａ．Ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｉｎｆｌｏ ｒｅｓｃｅｎｃｅｓｐｉｋｅｌｉｋｅｃｌｕｓｔｅｒ，ｃｏｍｐａｃｔｆｌｏｗｅｒａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔａｎｄｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｓｈａｐｅｄ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ ａｐｉｃａｌｄｏｍｉｎａｎｃｅｏｆｍａｉｎｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｌａｔｅｒａｌｂｒａｎｃｈ，ｐｏｄｄｅｆｏｒｍｉｔｙａｎｄｓｔｉｇｍａｐｒｏｔｒｕｓｉｏｎｗｅｒｅａｌｓｏ ｏｂｓｅｒｖｅｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂｒａｓ