干扰素增强gh3细胞中人生长激素基因表达机制-北京协和医院.pdfVIP

维普资讯 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ACTABIOCHIMICA etBIOPHYSICASINICA2002．34(5)：619—624 CN31—1300／Q 干扰素 增强GH3细胞中人生长激素基因表达机制 龚凤英 史轶蘩 邓洁英 (宰 美璧协和医院内分泌科，北京-00730) 摘要 为了研究干扰素7(IFN-7)对大鼠垂体 GH3细胞中人生长激素(hGH)基 因启动子活性的影响及其可能的 作用机制，采用荧光素酶报告基因方法，将含 hGH基因启动子 (一484～2bp)和荧光素酶报告基因的表达质粒 pGL3—484一L 单独转染或与垂体特异性核转录因子Pit一1蛋 白表达质粒(pcDNA-Pit一1一cDNA)或Pit一1反义寡核苷 酸(Pit一1ONE))共转染于大鼠垂体GH3细胞中，观察加入 IFN-7及细胞内信号转导途径的抑制剂后GH3细胞中荧 光素酶表达的变化，反映其对hGH启动子活性的影响；将含不同长度hGH基因启动子序列的荧光素酶表达质粒 pGL3—380一L (一380～2bp)、pGL3—250一L (一25O～2bp)、pGL3—132一L (一132～2bp)和pGI4—66一L (一66～ 2bp)分别转染GH3细胞，观察它们对 IFN一了的反应，以寻找 IFN一7影响hGH基因启动子活性的关键序列。结果 表明，IFN-7(1O5u／L，lO6u／L)均能促进大鼠垂体 G||3细胞中荧光素酶的表达，最高达对照组的 131％(P 0．001)；在胞内信号转导抑制剂中，只有丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号转导途径抑制剂PD98059(40tanol／ L)，能完全阻断 IFN一7的促进作用；Pit一1蛋白过表达和表达被抑制对 IFN．7的促进作用没有影响；含不同长度 hGH基因启动子序列质粒中，只有 pGL3—380一L 和pG 一250一L 仍具有对 IFN-7的反应性。这说明IFN一7能增 强大鼠垂体 GH3细胞中hGH基因的启动子的活性，此作用可能是通过激活细胞内依赖MAPK的途径完成的，并 与hGH基因上游一250--一132bp启动子序列密切相关，但与垂体特异性核转录因子Pit一1蛋白关系不大。 关键词 干扰素7；生长激素基因启动子；GH3细胞；荧光素酶报告基因 生长激素(GH)的合成和分泌主要受下丘脑产 发现 IFN—a能抑制小鼠垂体AtT-20细胞中阿里皮 生的生长激素释放激素(GⅧ H)和生长抑素(SS)的 素原 (proopiomelanocortin，P()MC)基因的表达，而 调控。GHRH通过激活细胞内cAMP—PKA信号转 且 IFN一7的调节作用主要是通过激活细胞 内的 导途径完成其调节作用。其中，垂体特异性核转录 JAK—SrAT(Januskinase—signaltransducerandacti— 因子 Pit一1蛋白，通过与生长激素基因启动子上的 vatoroftranscription)信号转导途径完成 【ll’]。但 两个 Pit一1位点结合，促进生长激素基因的转录…1。 IFN一了对垂体生长激素基因的表达是否有调节作 然而，越来越多的研究表明，免疫细胞分泌的 用，目前尚未见报道。本文采用荧光素酶报告基因 多种细胞 因子如 IL_1、IL-2、IL-6、TNF-a、LIF、 的方法，研究 IFN一7对大鼠垂体 GH3细胞中人生 TGFp等均能刺激或抑制垂体激素的合成和分 长激素(hGH)基因启动子活性的影响，并同时探讨 泌 【，。而且，在下丘脑和垂体腺中均有这些细胞 IFN一7发挥作用可能激活的细胞内信号转导途径和 因子及其受体的表达[。有研究报道，淋巴细胞合 关键启动子序列。 成的干扰素(IFN)对垂体激素的分泌也具有调节作 用。干扰素(IFN一7和 IFN—a)在整体水平和细胞水 1 材料和方法 (MaterialsandMethods)