猪toll样受体4基因snps功能分析-遗传.pdfVIP

HEREDITAS (Beijing) 2012 8 , 34(8): 1050―1056 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2012.01050 猪Toll 样受体4 基因SNPs 功能分析 1 1 2 1 2 1 2 杨秀芹 , 陈月婵, 汪亮, 李海涛 , 刘娣 , 关庆芝 , 付博 1. , 150030; 2. , 150086 Toll 样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)在机体的免疫反应中发挥重要作用, 该基因突变会影响受体的信 号转导能力和机体的疾病抗性/ 易感性。文章在前期工作的基础上, 进一步分析c.611 TA (p.Leu204His) 、c.1027 CA (p.Gln343Lys) 和c.1605 GT (p.Leu535Phe) 3 个错义突变对猪TLR4 功能的影响。利用RT-PCR 方法克隆 猪 TLR4 基因全长编码区并引入定点突变; 利用真核表达、双荧光素酶报告系统和Western blotting 方法在瞬时 转染的PK-15 细胞内研究3 个单核苷酸多态(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)对猪TLR4 配体识别和信号 转导能力的影响; 同时, 利用创造酶切位点 PCR-RFLP 方法分析对TLR4 活性有显著影响的点突变在民猪、大 白、长白和中国东北野猪4 个群体中的分布。结果, 成功获得了民猪 TLR4 基因的全长编码区和 3 个单碱基变 异体, 构建了不同等位基因的真核表达载体, 在PK-15 细胞内确定了c.1605 GT 变异导致TLR4 向下游传递信 号的能力显著降低(P0.01), 该SNP 只存在于民猪和野猪中且频率较高。猪TLR4 基因c.1605 GT 变异影响Toll 样受体的信号传递, 可能和机体的疾病抗性/ 易感性有关。 猪; TLR4; SNP; 功能分析 Functional analysis of SNPs in porcine TLR4 gene 1 1 2 1 2 YANG Xiu-Qin , CHEN Yue-Chan , WANG Liang , LI Hai-Tao , LIU Di , GUAN 1 2 Qing-Zhi , FU Bo 1. College of Animal Science Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 2. Heilongjiang Academy of Agricultural Science, Harbin 150086, China Abstract: Toll-like receptor 4 (TLR4) plays an important role in immune response and the polymorphism in it might affect protein signaling and host resistance/susceptibility to disease. This study was designed to characterize the functional relevance of 3 nonsynonymous single nucleotide polymorphisms (SNPs), c.611 TA (p.L