富含gc的dna片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因-新乡医学院学报.pdfVIP

第３４卷　第９期 新乡医学院学报 Ｖｏｌ．３４　Ｎｏ．９ ·７９４· 　 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 　 ２０１７年９月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｅｐ．２０１７ 欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉 欁 氉 欁 本文引用：陈思佳，赵春澎，张俊河，等．富含ＧＣ的ＤＮＡ片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因表达的影响及其位 欁 【基础研究】 欁 置效应［Ｊ］．新乡医学院学报，２０１７，３４（９）：７９４７９７．ＤＯＩ：１０．７６８３／ｘｘｙｘｙｘｂ．２０１７．０９．００４． 氉欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉 富含ＧＣ的ＤＮＡ片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因表达的影响及 其位置效应 陈思佳，赵春澎，张俊河，王小引，王天云 （新乡医学院生物化学与分子生物学教研室，河南　新乡　４５３００３） 摘要：　目的　分析富含ＧＣ的ＤＮＡ片段对中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞中转基因表达水平的影响及其位置效应。 方法　人工合成富含ＧＣ的ＤＮＡ片段，将其克隆到表达载体的表达盒的５′、３′端及两端，构建在载体不同位置插入富 含ＧＣＤＮＡ片段的３个新表达载体（ｐＩＲＥＳＧ１、ｐＩＲＥＳＧ２和ｐＩＲＥＳＧ３），分别转染 ＣＨＯ细胞并用荧光显微镜进行观 察；对照载体为ｐＩＲＥＳＥＧＦＰ。采用Ｇ４１８筛选稳定细胞株，流式细胞术分析增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因表达， 实时荧光定量聚合酶链式反应（ｑＲＴＰＣＲ）检测其转基因拷贝数。结果　成功构建了在载体不同位置含有ＧＣＤＮＡ片 段的３个载体，瞬时及稳定转染结果显示，在载体表达盒两端及３′端插入富含ＧＣＤＮＡ片段能够明显提高ＥＧＦＰ在 ＣＨＯ细胞中的表达水平。与对照载体比较，稳定表达情况下载体表达盒两端及３′端插入富含ＧＣＤＮＡ能分别提高转 基因表达水平约１．３９、１．３２倍，而在５′端插入富含ＧＣＤＮＡ片断对于提高基因表达水平作用尚不明显。表达盒两端 及３′端插入富含ＧＣＤＮＡ片段的转基因拷贝数比对照载体提高了约１．３２、１．２４倍。结论　富含ＧＣ的ＤＮＡ片段在 ＣＨＯ细胞提高转基因表达与其在载体上的位置有关，在载体表达盒两端或３′端插入一段富含ＧＣ的ＤＮＡ片段可以提 高转基因表达水平。 关键词：　富含ＧＣ的ＤＮＡ片段；转基因；位置效应 中图分类号：Ｑ７　文献标志码：Ａ　文章编号：１００４７２３９（２０１７）０９０７９４０４ ＥｆｆｅｃｔｏｆＧＣｒｉｃｈＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＣｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌｌｓ ａｎｄｉｔｓｐｏｓｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔ ＣＨＥＮＳｉｊｉａ，ＺＨＡＯＣｈｕｎｐｅｎｇ，ＺＨＡＮＧＪｕｎｈｅ，ＷＡＮＧＸｉａｏｙｉｎ，ＷＡＮＧＴｉａｎｙｕｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００３，ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＧＣｒｉｃｈＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＣｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙ（ＣＨＯ）ｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｐｏｓｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｓｙｎｔｈｅｔｉｃＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｗｉｔｈＧＣｒｉｃｈｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅ５′ ｏｒ３′ｏｒｂｏｔｈ５′ａｎｄ３′ｅｎｄｓｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃａｓｓｅｔｔｅｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｒｅｅｎｅｗｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓ（ｐＩＲＥＳＧ１，ｐＩＲＥＳＧ２ａｎｄ ｐＩＲＥＳＧ３）ｗｈｉｃｈｗ