凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立和初步应用.pdfVIP

and Methods Techniques Pl目替豢器忌脚蛐 www。pibb．ac．cn 凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用掌 筒 强 于汉杰陈超李铮“ (飚北人学牛命科学鬻院，国家微检测系统工程技术研究中心，西安710069) liver正 箍要建立了凝集素芯片技术硷溅糖蛋自酶方法，对实验条箨遴徭了侥纯，应j}j凝集素葱考初步稔溯分街了Changs 常肝细胞总爝白中的糖蛋白糖链构成．将凝集素ConA、GNA固定于环氧化修饰的玻片表面，用cv3标记标准糖蛋白 RNaseB，利用凝集素识别特辫糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法．摸索出最佧封闭剂魁含l％BSA的磷酸缓冲 液，最佳孵宵时间及温度为3 ，凝集索芯片检测糖蛋白糖链鹣呵行憔．最磊蟋凝集素芯片视步检测分析了Changsliver正常翳缨藏总蛋自串虢糖焱自糖链 liver Ilj常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能育多价Sia或GlcNAc、terminal“。l，3mannose、GalNAe、 构成，发现Changs 细胞癌变等牛命活动中起着霞攒作J{j，凶此近年t辩乏蛋白质的糖熬化研究受到广泛的重视，但}h于缺麓·种简便、快速、高通 量懿捻测予段，蛋臼矮糖基化修馋的硬究发疑缓馒．凝集素芯片技术的出现实现了鼹糖蛋矗的快速、准确、裹遥攮黥梭囊9 分析． 关键词凝集索芯片，糖基化修饰，糖蛋白，糖组学，肝细胞 学科分类号Q5—3 DOI：10．3724／SP．J．1206．2008．00382 蛋自艨的糖基化修饰广泛地存在于各种生物体 集素芯片技术稳测糖蛋白的方法，应用凝集素芯片 中，是一种重要的翻译后修饰作用[11．在微生物感 liver正常肝细胞总张白中 初步检测分析了Chang’S 染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动 的糖蛋白糖链构成．凝集素芯片能简便、快速、高 中，糖基化修饰起着至关重要的作用12t．在病理状 通晕=地检测分謇蠢糖蛋白，在较短时问内给出被检测 态下，蛋囱质和脂类糖基化的异常导致耱基化蛋自 糖蛋自的糖结稳指纹隧谱，它的出现将热速蛋自质 和糖脂中的糖链发生了结构和数量上的改变，从而 糖基化修饰的研究． 改变其雀物学功能．随着基冈组学和蛋臼质组学的 1材料与方法 研究发展，人们已逐渐认识到糖蛋白的速要性，但 目前对于糖蛋白麓磷究鞠簿滞后。嚣翦荣巍层橱技 1。1耪料 mmx25mmxl Seal 术、质谱、Western 玻璃片基(76 blotting、糖芯片技术已应用于 mm)贿于Gold 蛋白质糖基化修饰的研究并取得大量商价值的结 公司；环氧熬硅烷试齐UCGPTS)购白Sigma公司； 果，但是它们都有不足之处．亲和层析技术、质谱 凝集素Con 技术、Western GNA，ECA， blotting耗黠长，不能在短时间内获 得检测结采和实现遥釜纯．糖芯片把赛糖、糖脂或 糖蛋白固定在固相支持物上以检测蛋白质或细胞与 糖结合的性质【3卅，但是这种方法不能崴接检测糖 基化的改变，从丽限制了该技术的广泛应用。凝集 公司；小牛血清自蛋自(BSA)购自北京鼎国生物技 素芯冀蹩将各种不同来源的