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植物细胞工程 实验报告 学院： 农学院 班级： 07生物技术（2）班 姓名： 袁峰 学号： B0704091 时间： 2009年11月 指导老师： 莫庭辉 老师 目录 实验一、培养基母液的配制 实验二、培养基的配制与灭菌 实验三、香蕉吸芽的组织培养 实验四、烟草叶片的消毒、接种和培养 实验五、柱花草外植体的消毒、接种和培养 实验六、木薯外植体的消毒、接种和培养 实验七、桉树外植体的消毒、接种和培养 实验八、玉米不成熟胚的消毒、接种和培养 实验九、花生成熟胚的消毒、接种和培养 实验十、水稻盾片的消毒、接种和培养 实验十一、洋葱的组织培养（自选实验） 植物细胞工程实验 一、实验目的 1、了解植物组织培养技术的基本原理。 2、掌握植物材料灭菌、接种和培养。 3、学习培养基的配制与灭菌。 二、实验原理 根据植物细胞具有全能性的特点，在人工的控制条件下，将植物的任何器官、组织或细胞，放在人工合成的培养基中进行培养，使其生长、分化并形成完整植株。 实验一、培养基母液的配制 一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。 二、实验试剂与仪器设备 1、药品试剂： 母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。 2、仪器设备： 电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。 三、实验内容 （一）母液的配制 MS培养基母液方案配制如下表： 成 分 1L母液的用量(mg/L) 每升培养基取用量(ml) 备 注 大量元素(20X) NH4NO3 33000 50 KNO3 38000 KH2PO4 3400 MgSO4﹒7H2O 7400 CaCl2 6600 50 单独配制 铁盐(100X) FeSO4.7H2O 2780 10 Na2-EDTA 3730 微量元素（200X） KI 166 5 H3BO3 1240 MnSO4.H2O 3380 ZnSO4.7H2O 1720 Na2MoO4.2H2O 50 CuSO4.5H2O 5 CoCL2.6H2O 5 有机元素(100X) VB1 10 10 VB6 50 烟酸 50 甘氨酸 200 肌酸 10000 具体配制步骤如下： 1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中CaCl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。 2、微量元素母液的配制 无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL. 3、铁盐母液的配制 无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。 4、有机元素的配制 无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。 实验二、培养基的配制与灭菌 一、各培养基配制 1、香蕉培养基： 诱导和继代培养基：①、MS＋BA 3.0 mg／L ②、MS＋NAA 0.5 mg／L ③、MS 生根培养基： MS＋NAA0.5mg／L 烟草叶片培养基： 诱导和继代培养基：①、MS＋BA 1.0 mg／L ②、MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L ③、MS 生根培养基： MS＋NAA 0.2 mg／L 3、木薯外植体培养基： 诱导和继代培养基：MS＋BA