Limk1不同突变体HA融合表达载体构建及在细胞内定位.pdfVIP

第39卷第4期 贵阳 医学院学报 V01．39No．4 2014年8月 OFGUIYANGMEDICALCOLLEGE2014．8 JOURNAL 定位木 刘亚伟1，李 翠2，何敏毅3，赵 亮2，漆松涛1，陈剑荣3一 (1．南方医科大学南方医院神经外科，广东f-Bt510515；2．南方医科大学基础医学院重大疾病的转录组及蛋白质组学教育部重点实验 室，广东广州510515；3．南方医科大学珠江医院器官移植科，广东广州510282) [摘 要]目的：构建LIM激酶(Limk)1不同突变体的HA融合表达载体，并在真核细胞中表达，观察这些突 变体在细胞内定位。方法：利用聚合酶链式反应(PCR)扩增Limkl全长序列，构建HA—Limkl真核表达质粒；利 火获得目标片段插入载体的策略构建Limkl—NLS；将2表达质粒转染HepG2细胞，细胞免疫荧光方法以及核质 于细胞核。结论：成功构建了Limkl全长及不同突变体的HA融合表达载体，初步明确突变体在细胞内的定位。 【关键词]HM激酶l；载体构建；基因表达；融合蛋白；细胞内定位；突变体 [中图分类号]Q78[文献标识码]A[文章编号]1000．2707(2014)04-0475-04 A onthe andIntracellularLocalization Study Construction，Expression of Fusion Vector ofDifferentMutantsLimkl Expression LIU Yaweil，LICui2，HEMinyi3，ZHAOLian92，QISongta01，CHENJianron93 Medical ofSouthernUniversity，Guangzhou510515，Guangdong，China； (，．DepartmentofNeurosurgery，Na咖ngHospital andProteomeHuman the EducationChina， LaboratoryofTransctriptome of D蠡e∞酷Supportedby Ministryof of 2．Key School MedicalSciences Medical ofBasic ofSouthernUniversity，Guangzhou Medical ofSouthernUniversity，Guangzhou510282，Guangdong，China) ofOrganTransplantation．ZhujiangHospital construct cell vectorsofdifferentLimkl mutants eukaryoticexpression [Abstract]Objective：To fusedwithHAandto theintracellularloealizationsofthe study mutant．Methods：Usingpolymerase of full HA—Limkl chain Limkl reaction(PCR)for