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上皮性卵巢癌中内皮抑素及血管内皮生长因子表达 　 作者：程丽，隋丽华，刘梅梅，李文辉 【关键词】 内皮抑素； 血管内皮生长因子；卵巢肿瘤；免疫组织化学 　　0引言 　　肿瘤侵袭和转移与肿瘤新生血管的生成密切相关。内皮抑素(Endostatin)是近期发现的血管生成抑制剂，它能选择性地抑制内皮细胞的增殖并可诱导其凋亡[1]。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）是目前发现的最为关键的血管形成刺激因子，在实体瘤的发生发展中发挥着重要作用[2]，它能提高血管的通透性，引起血浆蛋白外渗，为新生血管提供必需的基质。本试验采用免疫组化方法对上皮性卵巢癌的Endostatin和VEGF蛋白的表达进行检测，旨在探讨两者在上皮性卵巢癌中的表达和意义。 　　1资料与方法 　　1.1标本来源48例标本取自哈尔滨医科大学附属第三医院1995~1999年卵巢癌肿瘤细胞减灭术手术切除标本，包括浆液性腺癌30例，粘液性腺癌12例，子宫内膜样癌6例。标本按国际妇产科联盟（FIGO）分期，Ⅰ、Ⅱ期18例，Ⅲ、Ⅳ期30例。标本按组织学分级分为G1 11例，G2 21例，G3 16例。所有患者术前均未接受化疗和(或)放疗。另取18例良性卵巢瘤组织和18例正常卵巢组织标本作为对照，所有标本均经100ml/L中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片。 　　1.2免疫组化染色（SP法）兔抗人Endostatin多克隆抗体为美国Neomarkers公司产品，鼠抗人VEGF单克隆抗体购自北京晶美生物技术开发公司。SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。用已知阳性标本切片和磷酸盐缓冲液分别作阳、阴性对照，DAB显色，苏木精对比染色，光镜观察。 　　1.3判定标准 　　1.3.1Endostatin光镜下细胞胞浆显示为棕色，判断标准以高倍镜下随机选择5个视野中平均阳性细胞比例≥50%为高表达，＜50%为低表达。 　　1.3.2VEGF阳性细胞胞浆显示为棕黄色，也有的病例细胞膜同时表达。判断标准以高倍镜下随机选择5个视野中平均阳性细胞数所占比例计，阳性细胞比例≥10%为阳性表达，＜10%为阴性表达。 　　1.4 统计学处理采用SPSS10.0统计软件包处理数据；率的检验采用χ2检验；预后分析采用多因素COX比例风险模型以及单因素分析。 　　2结果 　　2.1各类卵巢组织中Endostatin 和 VEGF表达的比较恶性肿瘤内的Endostatin高表达率明显高于良性肿瘤和正常卵巢，差异有统计学意义（χ2=25.42,Plt;0.01）。VEGF在恶性肿瘤中的表达率明显高于良性肿瘤及正常卵巢，相比较差异有统计学意义（χ2=40.49,Plt;0.01）。良性与正常组织Endostatin的高表达率和VEGF的阳性表达率比较，差异无统计学意义（Pgt;0.05），见表1。 　　2.2Endostatin和VEGF在卵巢上皮性癌中的表达及其与临床病理的关系见表2。 　　2.3各临床、病理因素对卵巢恶性肿瘤预后的影响COX模型结果显示，在各因素中，仅临床分期与患者的总生存期密切相关，是一项独立的预后因素（P=0.022）,相关系数为0.959，晚期卵巢癌患者（Ⅲ、Ⅳ期）的预后差，而Endostatin高表达以及VEGF阳性表达与预后无关（P=0.91，P=0.68）。从相关系数来看Endostatin(r=0.212)和VEGF(r=0.198)蛋白的表达对生存时间的影响均无显著性。 　　　表1各类卵巢组织中Endostatin和VEGF表达的相关性比较（略） 　　表2卵巢上皮性癌中Endostatin 和VEGF的表达及其与临床病理的关系（略） 　　2.4上皮性卵巢癌标本中Endostatin与VEGF表达的相关性两者同时高表达或阳性为26例，低表达或阴性为8例，而同时低表达和阳性为10例，高表达和阴性为4例，表明Endostatin和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达间有相关性（χ2=5.56,C=0.322,Plt;0.05），而在正常卵巢组织中两者无相关性。 　　3讨论 　　肿瘤的生长和转移需要不断地有新生血管的生成， 抑制肿瘤血管生成可抑制肿瘤生长。 Endostatin是一种近年来发现的强有效的血管内皮细胞生长抑制剂。 有研究结果证实VEGF与卵巢恶性肿瘤的增殖、 浸润和转移密切相关。 本研究发现上皮性卵巢癌中Endostatin的高表达和VEGF的阳性表达与良性卵巢和正常卵巢组织相比较差异有统计学意义， 提示了来源于ⅩⅧ胶原的活性Endostatin 在病理性和生理性抗血管生成的生物学功能的差异。 此外还发现， Endostain在晚期（Ⅲ、 Ⅳ）卵巢癌患者中的表达强于早期（Ⅰ、 Ⅱ）卵巢癌患者， 这与Hat