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SD 大鼠喉移植自然免疫排斥病理学观察 　【摘要】 【目的】对SD大鼠喉移植的自然免疫排斥过程进行病理学观察，定义移植喉急性免疫排斥反应的病理评价标准。【方法】实验采用作者已建立的改良模型进行鼠喉移植。实验组12例，受体和供体均为封闭群Ⅱ级雄性SD大鼠，移植术后第1，3，5，7，14，21天（各2例）解剖移植喉，常规病理观察移植喉的组织结构变化；对照组12例，受体和供体均为F344近交系大鼠，方法同实验组。【结果】实验组术后第1天移植喉表现为周围组织，黏膜固有层水肿；术后第3天时固有层增厚，炎症细胞浸润，小涎腺腺泡结构部分破坏，扭曲；呼吸道上皮部分坏死脱落，白细胞浸润，气管腔有浆液渗出；术后第5天小涎腺严重破坏、萎缩，气管上皮呈大部分坏死脱落，肌肉和甲状腺开始坏死、萎缩、炎症细胞浸润；术后第7天则软骨膜开始破坏，软骨周围有大量炎症细胞浸润，甲状腺、小涎腺、肌肉大量破坏，仅剩少量变性组织残留。术后第14天移植喉正常结构消失，大量炎症细胞浸润，软骨结构仅剩部分；术后第21天移植喉完全被疤痕组织替代。对照组术后第1、3、5天变化与实验组相近稍轻，术后第14天、第21天移植喉外周纤维包裹形成，喉结构存在，气管黏膜鳞状化，涎腺、甲状腺、肌肉部分萎缩，甲状软骨结构基本正常。【结论】同种异体SD大鼠异位喉移植的免疫排斥过程呈渐进性过程。黏膜上皮、涎腺、甲状腺、肌肉、软骨被机体免疫排斥破坏时间不一，黏膜上皮最早，软骨最迟。喉移植免疫排斥的时序性与免疫排斥程度分级相关。 【关键词】 器官移植； 喉移植/病理学； SD大鼠； 移植免疫学 合适的抗免疫排斥是非生命必需器官——喉移植走向临床前必需解决的问题，大鼠异位喉移植模型的建立为喉移植的免疫学研究提供了良好的动物模型。Strome 研究组[1-3]曾就该课题进行了较为深入的研究，阐明了Lewis大鼠同种异体喉移植自然免疫排斥过程的病理变化特点，并建立了鼠喉移植免疫排斥分级评价系统。本课题组已经采用近交系F344大鼠建立了鼠喉移植改良模型[4]，并采用透射电镜对供体喉体外保存进行研究，阐述了不同体外保存方法离体喉不同时段的超微结构改变[5,6]。本研究采用中山大学实验动物中心可获取的Ⅱ级封闭群SD大鼠为实验对象进行喉移植，观察其自然免疫排斥过程的病理学变化，为本课题组后续的喉移植免疫学研究奠定基础，同时为移植喉急性排斥反应的病理活检评价标准提供参考依据。 1 材料和方法 1.1 实验动物 实验组喉移植12例，供体和受体动物均为Ⅱ级封闭群非近交系雄性SD大白鼠，鼠龄4～6个月，质量300～450 g，均购自中山大学北校区实验动物中心，全部动物均经广东省实验动物中心检测合格，择质量相近者进行配对移植。对照组喉移植12例，供体和受体均为F344近交系雄性大白鼠，质量300～450 g，择质量相近者进行配对移植。 1.2 实验器械和场地 实验器械：动物手术操作台；10倍显微手术放大镜（34X型，上海光学仪器厂）；显微手术器械，血管缝线用11-0尼龙线（上海医用器械厂生产）。全部实验在中山大学北校区肿瘤防治中心Ⅱ级以上动物实验室进行。 1.3 移植方法 按照本课题组已建立的鼠喉移植改良模型[4]进行。切取包含喉、喉咽、颈段食管、舌根、舌骨、甲状腺、颈段气管在内的移植喉复合体，保留双侧颈总动脉及其分支——甲状腺上动脉和咽升动脉。移植喉以4 ℃的肝素液冲洗直至对侧颈总动脉流出液清澈，喉体变白后置于4 ℃的UWS液待移植。切除受体鼠的左侧颌下腺，暴露同侧颈外静脉和颈总动脉，将移植喉双侧颈总动脉分别与受体鼠的左侧颈外静脉和颈总动脉行端-端吻合，从而将移植喉植入于受体鼠左侧颈部，解剖受体鼠对侧颈外静脉，每100 g体质量注射青霉素20万U＋5％GNS 5 mL，切口放置胶片引流1条，关闭切口。术后实验动物置于普通锯末垫料的饲养笼里，术后连续3 d每100 g体质量皮下注射补液青霉素20万U＋5％GNS 2 mL。引流胶片术后36 h拔除。 1.4 免疫排斥过程的观察方法 实验组分别于术后第1，3，5，7，14，21天再次手术，仔细解剖移植床，注意观察移植喉存活情况，大体观察内容包括：动、静脉通畅与否、喉的血流灌注、喉腔内有否分泌物、喉结构（包括甲状软骨、气管、肌肉、甲状腺、气管黏膜）是否存在。作记录后切取包括双侧血管蒂的移植喉标本，40 ml/L甲醛固定，分别沿喉上缘、第二气管环横断面或者沿着喉正中行矢状位切片4 μm，常规HE染色，行镜检。对照组为前述近交系F344大白鼠喉移植，实验方法同实验组。 1.5 重复实验 在评价时确认为梗死和/或感染的移植重做，直到术后第1，3，5，7，14，21天均有2个移植喉可供免疫排斥病理学评价。梗死的评价标准：肉眼动脉和静脉血管蒂均可见栓塞，镜下表现为黏膜