切割穹隆海马伞后大鼠海马中83 ku差异蛋白质谱分析.docVIP

切割穹隆海马伞后大鼠海马中83 ku差异蛋白质谱分析 　 作者：朱蕙霞，秦建兵，金国华，田美玲，张新化，黄镇 【摘要】 　　目的： 探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能。 方法： 切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)，应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对83 ku差异蛋白进行检测和功能分析。 结果： 质谱分析找到了17组肽段，这些蛋白按照其功能可以分为：细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白。结论： 切割穹隆海马伞海马83 ku差异蛋白可以通过参与Rho信号通路，调控神经干细胞向神经元分化。 【关键词】 83 ku蛋白； 切割穹隆海马伞； 海马； 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳； 质谱分析 　　［Abstract］ Objective: To explore the ingredients and functions of the active 83 ku proteins inducing NSCs to differentiate into neurons from the fimbria/fornix transected hippocampus.Methods： The SpragueDawley rats′ hippocampi on the 14th day after fimbria/fornix transection were used for NativePAGE. Electrospray ionization mass spectrometry，protein data bank and bibliometrics were applied to identify the 83 ku proteins and analyze their functions. Results： Mass spectrometry analysis of 83 ku protein found 17 groups of peptides which were divided into several functional groups：cytoskeletal protein，enzyme in metabolism，signal transduction，protein degradation，oxidative stress，neurotransmitter transport，synapse formation and unknown function protein etc. Conclusion： 83 ku proteins in the fimbria/fornix transected hippocampus may regulate the differentiation of NSCs into neurons via Rho pathway. 　　［Key words］ 83 ku protein； fimbria/fornix transection； hippocampus； Native PAGE； mass spectrometry analysis 　　神经干细胞的发现为中枢神经损伤、退行性疾病以及脑肿瘤等的治疗提供了新思路，但其临床应用还要解决如何诱导神经干细胞迁移及分化等问题。我们近期的研究［1，2］观察到，移植至切割穹隆海马伞侧海马齿状回中迁移的神经干细胞密度明显大于正常侧海马中迁移的密度，在切割侧移植的神经干细胞更易于向神经元分化；在体外细胞培养中，切割穹隆海马伞的海马提取液也比正常海马提取液更能促进神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化［3］。在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)83 ku蛋白胶条与神经干细胞共培养，证实该差异蛋白能够诱导神经干细胞向神经元分化，在此基础上［4］，本研究进一步应用质谱分析探讨83 ku差异蛋白的组成成分及其功能。 　　1 材料和方法 　　1.1 切割大鼠穹隆海马伞 　　取220～250 g成年SD大鼠10只（南通大学实验动物中心提供），参照Paxinos图谱确定双侧穹隆海马伞的切割范围，按文献［2］方法进行双侧穹隆海马伞切割，然后按性别分笼饲养。 　　1.2 Native PAGE 　　术后14 d取双侧海马组织制成匀浆，进行蛋白定量，然后将蛋白质浓度稀释调整为3 μg／μl后分装，冻存于-70℃冰箱中备用。按文献［5］方法进行NativePAGE电泳，选取部分胶条进行考马斯亮蓝染色、脱