六味抗衰饮对衰老模型大鼠线粒体DNA含量及氧自由基影响.docVIP

六味抗衰饮对衰老模型大鼠线粒体DNA含量及氧自由基影响 　【摘要】 目的： 从肝细胞线粒体DNA（mtDNA）和氧自由基的角度，探讨六味抗衰饮延缓衰老的可行性和可能的作用机制，为临床提供实验依据. 方法： 将36只SD大鼠随机分成3组，每组12只，即青年对照组、衰老模型组、六味抗衰饮组. 衰老模型组、六味抗衰饮组给予D半乳糖溶液造模，青年对照组给予生理盐水. 六味抗衰饮组在造模的同时给予治疗，青年对照组和衰老模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续40 d. 检测肝细胞mtDNA的相对含量、血清SOD活性及MDA含量作比较. 结果： 六味抗衰饮能够降低衰老状态下大鼠肝细胞mtDNA相对含量及血清MDA含量，提高血清SOD活性（Plt;0.05）. 结论： 六味抗衰饮组具有减轻D半乳糖诱导亚急性衰老动物模型的氧化损伤，保护肝细胞mtDNA，从多方面延缓机体衰老的作用. 【关键词】 衰老 六味抗衰饮 DNA 线粒体 氧自由基 大鼠 　　0引言 　　中医学对衰老的观察和在延缓衰老方面的实践有着悠久的历史，历代医家多用补肾为主的方药来延缓衰老. 在实践中我们发现，脏腑虚衰与痰浊、积滞、瘀血互为因果不断恶性循环，是导致衰老的重要因素［1-3］, 据此立法创制了六味抗衰饮.在过去的研究中，我们观察到本方能明显改善老年患者倦怠健忘、头晕失眠、便秘等症状.本实验观察了六味抗衰饮对D半乳糖致衰大鼠肝细胞线粒体DNA及氧自由基的影响. 　　1材料和方法 　　1.1材料SD大鼠36只，雌、雄各半，清洁级，鼠龄2 wk左右，体质量200~220 g，贵阳医学院动物中心提供. D半乳糖由上海恒信化学试剂有限公司提供. 肝细胞mtDNA提取所需试剂由贵阳医学院设备供应科和昆明绿盟试剂公司提供. SOD活性及血清MDA含量测定所需试剂盒由南京建成生物工程研究所提供. 低温高速离心机（德国Heraeus Biofuge 22R），紫外分光光度计（日本岛津UV365）. 六味抗衰饮（红参10 g，枸杞子15 g，决明子15 g，三七花10 g，玫瑰花10 g，绞股蓝20 g）由贵阳医学院附属医院中药房提供，常规水煎两次，药液经纱布过滤后混合并浓缩至1 g生药/mL，4℃保存. 　　1.2方法 　　1.2.1衰老动物模型建立［1］及中药治疗将实验大鼠随机分成3组，每组12只，即青年对照组、衰老模型组、六味抗衰饮组. 将大鼠适应性喂养1 wk后，衰老模型组、六味抗衰饮组每日按公斤体质量皮下注射D半乳糖溶液125 mg/（kg·d），青年对照组每日皮下注射等量生理盐水1次，连续40 d. 六味抗衰饮组在造模的同时按每日1.5 g/100 g灌胃给药，青年对照组和衰老模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续40 d. 　　1.2.2血清及标本制备实验40 d时各组动物禁食过夜，将大鼠固定好，剪开腹股沟动脉处皮毛，局部消毒，分离并剪断腹股沟动脉，取血3 mL，3000 r/min，离心10 min，吸取血清用于SOD活性及MDA含量测定. 采血后，断颈处死大鼠，立即剖腹取出肝脏，剥离干净、生理盐水冲洗、滤纸吸干、液氮冻存（-196℃）备用，用于测定mtDNA含量. 　　1.2.3肝细胞mtDNA含量检测［2］采用碱变性法提取肝细胞mtDNA,采用紫外分光光度法测定其含量. 　　1.2.4血清氧化指标检测按试剂盒所述方法测定大鼠血清SOD活性、MDA含量. 　　统计学处理： 实验数据均x±s表示，用SPSS11.5统计软件进行统计分析，均数比较采用方差分析及LSDt检验，Plt;0.05为有统计学意义. 　　　2结果 　　2.1大鼠肝细胞mtDNA相对含量的变化造模40 d后，衰老模型组与青年对照组比较，肝细胞mtDNA相对含量升高，差异有统计学意义（Plt;0.05）；六味抗衰饮与衰老模型组比较，肝细胞mtDNA相对含量降低，差异有统计学意义（Plt;0.05，表1）. 　　2.2大鼠血清SOD活性、MDA含量变化造模40 d后，衰老模型组与青年对照组比较，血清SOD活性明显降低，血清MDA含量升高，差异有统计学意义（Plt;0.05）；六味抗衰饮组与衰老模型组比较，血清SOD活性明显升高，血清MDA含量降低，差异有统计学意义（Plt;0.05，表1）. 　　表1大鼠肝细胞mtDNA相对含量和血清SOD活性、MDA含量变化（略） 　　aPlt;0.05 vs 青年对照； cPlt;0.05 vs 衰老模型. 　　3讨论 　　衰老涉及机体的多个系统和器官，是一个多基因、多因素参与的复杂过程. 近年来，“衰老线粒体学说”已逐渐成为衰老理论的研究热点［3-4］, 自1989年 Linnane等提出线粒体衰老假说，人们就开始关注线粒体DNA与衰老关系的研究.体细胞mtDNA裸