六月青总皂苷对HepG2.2.15细胞HBV复制抑制作用.docVIP

六月青总皂苷对HepG2.2.15细胞HBV复制抑制作用 　 作者：林兴， 黄权芳， 张士军， 刘曦， 黄仁彬 【摘要】 目的观察六月青总皂苷（the terpenoids of Liuyueqing，TLYQ）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。方法采用血清药理学方法，在HBV的体外细胞培养系统中（2.2.15细胞）进行TLYQ抗HBV作用观察。结果TLYQ含药血清在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制细胞HBV DNA的复制，其作用呈明显的量效和时效反应关系。结论TLYQ在体外能明显抑制HBV，是六月青主要活性成分之一。 【关键词】 六月青总皂苷； 乙型肝炎病毒； HepG2.2.15细胞 　　Abstract：ObjectiveTo study anti-HBV activity of the terpenoids of Liuyueqing (TLYQ) in vitro.MethodsThe HBV in vitro cell culture system (HepG2.2.15 cell) was used for examining the anti-HBV activity of TLYQ with Serum-pharmacology. ResultsThe serum containing TLYQ could decrease the HBV DNA level in HepG2.2.15 cell, and its inhibitory effects were dose-and time-dependent.ConclusionTLYQ can inhibit HBV DNA in vitro significantly , and it maybe one of the main active components of Liuyueqing. 　　Key words：The terpenoids of Liuyueqing（TLYQ）； HBV ； HepG2.2.15 cell 　　六月青（Liuyueqing，TLYQ）系爵床科（Acanthaceae）植物肖鸡笼（顶花马兰）Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu ［Strobilanthes affinis (Griff) Y.C.Tang］的干燥地上部分［1］。六月青是复方六月雪（CLYX）主要成分之一，本课题组前期研究表明，CLYX具有明显地抗HBV［2，3］和改善急性化学性肝损伤的作用［4］。本研究以转染有HBV DNA的HepG2.2.15为模型，采用中药血清药理学方法，观察TLYQ对HBV复制的影响，并初步探讨其作用机制，为筛选出六月青中抗HBV主要活性部位提供实验依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药物六月青总皂苷，由广西医科大学药理学教研室和广西医学科学实验中心自行提取。 　　1.2 动物Wistar大鼠，雌雄各半，体质量（250±10）g，由广西医科大学实验动物中心提供。 　　1.3 细胞株HepG2.2.15细胞株，购自北京医科大学第一附属医院病毒研究所，本室自行传代，定期用G418筛选。 　　1.4 试剂阿昔洛韦（Aciclovir　ACV）：湖南迪诺制药有限公司医药工业研究所产品，批号:RPMI1640培养基：美国Gibco公司，Cat№21202-016；胎牛血清：美国Gibco公司，Cat№21607-042；G418：美国Sigma公司，Cat№228527-72；HBV DNA荧光定量PCR试剂盒：深圳匹基生物工程股份有限公司，批号 　　1.5 仪器iCycler FQ实时荧光定量PCR仪：美国Bio-Rad公司；CO2孵箱：美国Thermo　Forma公司，Model311。 　　2 方法 　　2.1 六月青总皂苷的制备六月青粗粉1.0 kg，加10倍量80%乙醇回流提取3次，1.5 h/次，减压回收乙醇至无醇味，分别用石油醚、氯仿、醋酸乙酯萃取，弃去有机溶剂萃取液，最后再用水饱和正丁醇萃取，取正丁醇萃取液减压浓缩至干，得到41.28 g浸膏，上处理好的AB-8型大孔树脂柱（40 mm×800 mm），分别用6BV的30%乙醇和50%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压回收乙醇， 60℃的减压恒温干燥箱中干燥得4.28 g淡黄色化合物，经常规化学定性试验证实为皂苷类，利用香草醛-硫酸分光光度法测定总皂苷含量［5］，纯度为85.8%。 　　2.2 TLYQ含药血清的制备3月龄Wistar大鼠50只，随机分为5组，每组10只。①空白对照组：予等量的生理盐水；②阳性对照组：ACV 0.1×10-3 g·kg-1·d-1；③TLYQ