石蜡切片法取材与固定.pptVIP

一、石蜡切片法（取材与固定） 生物体大部分是不透明的，不能直接在显微镜下观察，必须采用特殊的方法对其进行处理，才能观察其内部的细微结构。 切片法： 根据对组织包埋介质不同分为石蜡切 片法、火棉胶切片法、冰冻切片法等。 非切片法：包括整体制片法、涂布法、压片法、 磨片法、解离法等。 石蜡切片法在研究细胞、组织、胚胎以及形态等方面是最为理想的制片方法。广泛用于医院、医科院校、生物医学研究机构、农科、畜牧兽医等动植物组织研究，尤其在病理学方面是诊断疾病的重要工具之一。 石蜡切片的主要步骤： 一、取材 二、固定 三、洗涤 四、脱水 五、透明 六、透蜡与包埋 七、切片 八、贴片 九、染色 十、封藏 一、实验原理： 1、取材 指从人体或实验动物体内取下所需观察的组织材料的过程。 材料的选择是制作切片的第一步。用于制片的动、植物材料应选择新鲜的，用陈腐的材料制片往往不能反映材料的真正情况。 2、固定: 就是借助某类化学药品的作用,使细胞组织的形态保存下来,不使其改变形态和变质的过程。目的是有利于增加细胞内含物的折光程度，增加媒染作用或染色能力；同时可使材料适当变硬，并具有一定的坚硬性便于切片。 二、实验程序 1．取材的方法 根据取材的需要，用锋利的单面刀片切取材料（动物组织厚度一般不超过3mm有规则的四方体1.5×1.5×0.5cm3，动物的肠道、植物的根、茎、叶等组织取3～5mm长一小段）。 取材要点： 取材动作要迅速，以免组织结构发生变化； 根据需要选择部位取材，尽可能避免损伤； 切取病理材料时，连同正常组织也须切一部分，以便比较观察。 2．固定的方法 根据材料的种类、大小、性质与固定液的种类、性质、渗透力的强弱来确定固定时间，可以从几小时到几十小时，甚至数天。如将已切的小鼠肝组织快速放入10%的福尔马林溶液中固定12～24时即可。固定剂一般为组织块体积的10～15倍。 固定材料时应注意的事项： 一般固定液以新配为好，置阴凉处，以防失效； 有些混合固定液会发生氧化还原作用，一定要现配现用； 固定时间必须充分，对于水分较多的材料，中间应更换1～2次新鲜固定液；如标本块多时，固定时不应重叠； 不要先将标本块放入容器后再注入固定液，以免标本贴付于器皿，形成固定不均匀之弊。 固定材料的容器应注明固定液、材料来源、日期、操作者签名等，以免与其他材料混淆。 任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。 三、常用固定液的种类 （一）单一固定液 1、酒精（C2H5OH）：无色液体，可与水任意比例混合，是一种还原剂，不可随意与重铬酸钾、铬酸、锇酸等混合。酒精渗透力很强，易引起组织收缩，固定用的适宜浓度一般为70％。 2、甲醛（HCHO）：无色气体，易挥发，具有强烈的刺激性气味，37～40％的水溶液称为福尔马林。甲醛也是一种强的还原剂，不可与铬酸、重铬酸钾、四氧化锇等氧化剂混合。穿透力虽不如酒精，但不会象酒精那样引起组织强烈收缩，两者混合使用效果更好。常用于固定和保存标本的福尔马林浓度为5～10％。 3、醋酸（冰醋酸，CH3COOH） 4、苦味酸（三硝基苯酚，C6H2(NO2)3OH） 5、重铬酸钾(K2Cr207) 6、铬酸（三氧化铬水溶液，H2CrO4） 7、四氧化锇（锇酸，OsO4） 8、氯化汞（升汞或二氯化汞，HgCL2） （二）混合固定液 1、卡诺（Carrnoy）氏固定液 2、FAA固定液（醋酸－酒精－福尔马林混合液） 3、波恩（Bouin）氏固定液 4、秦克（Zenker）氏固定液 5、纳瓦兴（Nawashin）氏固定液 四、实验步骤 1、动物取材： 分为活体直接取材、麻醉后取材、处死后取材。无论采取那种处死方法，多应避免由于痛苦引起挣扎，而造成组织结构发生变化，同时取样必须迅速，越快越好。因为动物一旦死亡，细胞便开始自溶。 2、取材位置： 每二人一组分别任取KM小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胃、肌肉组织中的两种，切成1.5×1.5×0.5cm3的四方体，快速放入10～15倍的10%的福尔马林溶液中固定12～24时。要求每