河南地区NADC30-like PRRSV毒株的增殖特性与遗传进化分析.pdfVIP

河南农业科学，2〇n ，46(3) :1 _128 Journal of Henan Agricultural Sciences d〇i ：10. 15933/j. cnki. 1004-3268.2017.03.024 河南地区 NADC 30 - like PR R SV 毒株的增殖特性与 遗传进化分析 王 林 建 1 ，，郭 振 华 ，乔 松 林 ，陈 鑫 鑫 ，张 改 平1， ** (1.河南农业大学生命科学学院，河 南 郑 州 450002; 2.河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室 / 农业部动物免疫学重点开放实验室，河 南 郑 州 450002) 摘 要 ：为研究河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（P R R S V ) 的 流 行 特 点 和 遗 传 变 异 情 况 ，采集河南 省滑县地区猪繁殖与呼吸综合征（PRRS) 发 病 猪 场 中 的 病 料 ，经 研 磨 、稀 释 、离心处理后将悬液上 清接种于原代猪肺泡巨噬细胞，进 行 病 毒 分 离 培 养 ，结 果 显 示 ，P A M 出 现 典 型 细 胞 病 变 效 应 ，将得 到 的 分 离 株 命 名 为 HNhx 。应 用PRRSV N 蛋 白 的 特 异 抗 体 进 行 间 接 免 疫 荧 光 （IFA)试 验 ，结果表 明 ，接 种 H N h x 分 离 株 的 P A M 出 现 特 异 性 荧 光 ，证 明 该 分 离 株 为 P R R S V 。应 用R T - P C R 技术对 Nsp 区进行扩增分析，根 据 扩 增 目 的 产 物 大 小 推 测 H N h x 分 离 株 为 NADC30 - like毒 株 。遗传分 析 发 现 ，与其他参考毒株相比，H N h x 毒 株 的 ORF3 、O R F 4 和 0 R F 5 基 因 与 N A D C 3 0 毒株的同源性最 高。基 于 ORF3 、O R F 4 和 0 R F 5 序 列 构 建 进 化 树 ，系 统 进 化 分 析 的 结 果 表 明 ，H N h x 归于 NADC30 - like亚 群 。 关 键 词 ：猪 繁殖与呼吸综合征病毒；分 离 ；鉴 定 ；序列分析 中 图分类号：S852.4 文 献 标 志 码 ：A 文 章 编 号 ：1004 -3268(2017)03 -01 -07 Proliferation Characteristics and Phylogenetic Analysis of One NADC30-like PRRSV Strain Isolated in Henan W A N G Linjian1,2 , G U O Zhenhua2 , QIAO Songlin2 , C H E N Xinxin2* , Z H A N G Gaiping1,2* (1. College of Life Sciences, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002 , China ； 2. Key Laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture/Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology, Henan Academy of Agricultural Sciences , Zhen