萘哌地尔Ⅱ号衍生物对血栓地形成和血小板聚集影响和机制得研究.pdfVIP

论文：萘哌地尔H号衍生物(vM 1I)对血栓形成和10l小板聚集的影响及机制研究 1．材料与方法 1．1材料 I．I．1试剂 YM II：浅灰色粉术，纯度99％，由中国科学院贵州天然药物化学重点实 验室提供，用乙醇(终浓度10％)溶解后，临用时用三蒸水稀释配制成所需浓度。 无水乙醇：遵义师范学院化学试剂厂出品。 戊巴比妥钠：中国医药(集团)上海化学试剂公司进E1分装，批号 肾上腺素(Adr)；上海禾风制药有限公司，国药准字 二磷酸腺苷(ADP)：华美生物工程公司。 乙酰羟甲基酯(Fura一2／AM )：美国Sigma公司产品。 Triton x～100：购自华美生物工程公司。 145mmol／L，KCI lmmol／L， 无钙Hepes缓冲液：NaCl 5mmol／L，MgS04 Hepes 11 mmol／L柠檬酸。 ACD抗凝液：86mmol／L柠檬酸钠，1mmol／L葡萄糖，53 tetracacetic acid，EGTA)，购自华美生物工程公司。 COMPANY。 CHEMICAL 消炎痛：CAYMAN 苏州医学院血栓与止血研究室。 血栓烷B2(TXB2)放射免疫分柝试剂盒： 氯化钠，氯化钾，硫酸镁，柠檬酸，葡萄糖系重庆北碚化学试剂厂出品的分 析纯试剂。 1．1．2器材 LBJ-NJ：血液凝聚仪：北京普利生仪器中心。 sHA—_C控温水浴震荡器：产自深圳天南海北实业有限公司。 飞鸽牌LxJ—IIB低速大容量离心机：产自上海安亭仪器设备厂。 RF一5000荧光分光光度仪：日本，岛津公司。 1．1．3实验动物 sD大鼠：雌雄各半，体重(240±20)g，由第三军医大学野战外科研究所动物 室提供，合格证号：SCXK(渝 论文：萘哌地尔II号衍生物(ⅧII)对血栓形成和血小板聚集的影响及机制研究 家兔：雌雄各半， 体重(2．0+0．2)kg遵义医学院实验动物中心提供。 1．2实验方法 1．2．1 YM II对SI)大鼠动静．脉旁路血栓形成的影响 1．2．1．1动物模型取sD大鼠称重后，腹腔注射3％戊巴比妥钠(30mg／kg) 麻醉，麻醉后仰卧位固定并分离出左颈外静脉和右颈总动脉，在聚乙烯管的中 段放一根长5cm的丝线，以0．5％肝素生理盐水溶液充满聚乙烯管腔，当…端插 入左颈外静脉后，将该静脉夹住，将管的另一端插入右颈总动脉。 1．2．1．2血栓测定大鼠模型做好后，从尾静脉分别注射低、中、高剂量的 YMII药液，空白组注射同剂量体积的生理盐水，溶媒组注射同剂量体积的溶媒 作对照，5rain后打开动、静脉小夹丌放血流，血流从右颈总动脉流经聚乙烯管 返回左颈外静脉，开放血流15min后中断血流，迅速取出丝线称重，该重量减 去原丝线重量即血栓湿重，比较不同剂量YlvlII药液对大鼠血栓重量的差异来 观察YMII对大鼠动一静脉旁路血栓形成的影响，按下面的公式计算血栓降低 率【51。 血栓降低率=(溶媒组的栓重一给药组的栓重)／溶媒组的栓重)×100％ YM 1．2．2 II对血小板聚集的影响 1．2．2．1斑小板的制备家兔用3％戊巴比妥钠(30mg／kg)耳缘静脉麻醉， 麻醉后颈动脉插管取血，加入3．8％的枸椽酸钠抗凝(血：抗凝齐lJ=9：1)，将其 为4×109／L～4．5×10机。，待用。 1．2。2。2血小板聚集的测定每份取上述调好数PRP200斗L，分别加入低浓