乙酰肝素酶-MMP-9在胰腺癌侵袭转移中表达相关性及临床意义.docVIP

乙酰肝素酶\MMP-9在胰腺癌侵袭转移中表达相关性及临床意义[摘要] 目的:检测乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胰腺癌、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中的表达及相互关系,分析其与临床预后及浸润转移的关系。方法:应用免疫组化SP法检测92例胰腺癌、24例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织中HPA、MMP-9的表达水平,分析两者的表达与临床病理指标的关系,建立Pearson等级相关分析。结果:HPA在胰腺癌中的表达明显高于慢性胰腺炎和正常胰腺组织(77.2%、25.0%、0,P [Key words] Heparanase; Matrix metalloproteinase 9; Pancreatic carcinoma 胰腺癌是一种恶性程度高、病情隐匿及预后差的消化道恶性肿瘤,由于它的高侵袭性和高转移率,使近80%的患者无法获得根治性治疗,经手术、介入、药物等多种方式治疗后1年生存率仅为21%,成为危害人类健康最为严重的恶性肿瘤。癌细胞侵袭和转移的一个重要机制是降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)和基底膜(basement membrane,BM),最近研究发现,乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是唯一能裂解BM中硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteogly-cans,HSPGs)的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链的核苷内切酶,能降解BM及ECM,参与肿瘤侵袭转移。因此,HPA成为近几年肿瘤研究的热点[1]。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)是一类与肿瘤发生、侵袭和转移密切相关的蛋白水解酶。研究表明,MMP-9在多种肿瘤组织中的表达增加[2]。MMP-9编码产物为明胶酶B,主要降解以Ⅳ型胶原为主的基底膜屏障,改变细胞的微环境,这对于肿瘤形成是非常重要的。本研究采用免疫组织化学方法检测胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中HPA和MMP-9的表达情况,以探讨二者在胰腺癌中的表达特点、相互关系及临床意义。 1 材料与方法 1.1 材料 收集2002～2008年河南大学淮河医院和河南大学东京医院胰腺癌手术标本92例,其中,男性58例,女性34例;年龄32～90岁,平均61.8岁。全部病例术前均未接受放疗或化疗,均经组织病理学诊断为胰腺癌,其中,导管腺癌71例,实性乳头状癌13例,黏液腺癌8例。组织学分级:高分化腺癌45例,中分化腺癌36例,低分化腺癌11例。另取同期病理证实的24例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织作为对照。 1.2 方法 采用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法。兔抗人MMP-9单克隆抗体、兔抗人HPA单克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司;兔抗SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。组织标本经石蜡包埋作5 μm连续切片,行HE染色用于重新确认病理结果,免疫组化按试剂盒操作说明进行。用已知的胰腺癌阳性片作为阳性对照,以0.05 mol/L PBS液代替一抗作为阴性对照。HPA和MMP-9均以细胞胞浆中出现清晰棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞,MMP-9有时亦见于胞膜,细胞核偶见。阳性结果判定标准:染色切片中计数10个高倍视野阳性细胞百分率,阳性细胞率70%为强阳性(+++),50%～70%为阳性(++),30%～49%为弱阳性(+), 2.4 胰腺癌组织中MMP-9的表达和临床病理指标的关系 MMP-9在胰腺癌组织中的表达与性别、年龄、组织学分级及1年存活率无关,而与患者的周围脏器浸润、淋巴结转移情况有关(P1年者。 MMPs是高度保守的依赖于锌离子的内切蛋白水解酶家族,可降解BM和ECM的大多数蛋白质,目前已发现了至少26个成员,其中属于明胶酶的明胶酶B(即MMP-9)主要降解明胶和基底膜Ⅳ型胶原,导致肿瘤细胞沿着破损的基底膜向周围组织浸润转移。文献表明,肿瘤侵袭、转移的潜能与肿瘤细胞产生MMP-9的能力有着密切的正相关关系,它不仅参与ECM的降解,而且还对肿瘤细胞的黏附能力有影响[7]。本研究显示,MMP-9在胰腺癌组织中的表达与性别、年龄、组织学分级无关,而与肿瘤侵犯周围脏器、淋巴结转移有密切的关系[8-9],这与国外学者的报道基本一致[10],说明MMP-9在胰腺癌的发生及发展过程中起重要作用,且MMP-9阳性表达可作为胰腺癌浸润转移的重要分子标志之一。 目前关于HPA与MM-9关系的研究偶见报道[11]。本研究发现,HPA与MMP-9在胰腺癌浸润、