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T淋巴细胞转化试验 （T lynrphocyte transformation test） 正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中，受到特异性抗原或有丝分裂原（植物血凝素或刀豆素等）刺激，细胞的代谢和形态可发生一系列变化。主要表现为电荷的改变，细胞内蛋白质和核酸合成增加，及以细胞形态可转化为淋巴母细胞。为此，在体外利用各种刺激剂激发淋巴细胞，根据其转化程度可测定T淋巴细胞的应答功能。这类方法称为淋巴细胞转化试验（lymphocyte leansformstoin test）简称淋转试验，在临床上现已作为测定人体细胞免疫功能的指标之一。细胞免疫缺陷时，这种转化功能也降低。目前最常用植物血凝素（PHA）作为分裂原来检测淋巴细胞转化功能，称PHA刺激淋巴细胞转化试验。 体外引起T淋巴细胞转化的刺激物种类颇多，大致有以下几类： （1）非特异抗原刺激物，如从豆类中提了的植物血凝素（PHA）和刀豆素A（ConA）等，通称为促有丝分裂素（mitogen）。 （2）特异性抗原刺激物，如结核菌纯化蛋白衍生物（purifeg protein derivative 简称PPD）等。 （3）组织抗原和抗血清，如同种白细胞，抗淋巴细胞血清等。 上述各种刺激物中以PHA应用最广，在体外淋巴细胞培养中，可使正常人外周血液中T淋巴细胞几乎均起转化，其所引起的淋巴细胞转化率大大超过特异性抗原的作用。但这种反应与机体是否致敏无关，因此是属于非特异性的淋转试验。特异性抗原仅能使相应抗原致敏的淋巴细胞发生转化，转化率一般在5-30%左右。虽然T淋巴细胞对非特异性和特异性抗原的识别过程不同，但被激活后，所发生的分裂和增殖反应却是相同的。因此根据PHA激活T淋巴细胞分列增殖反应的程度，可以推测T淋巴细胞识别特特异性抗原后的增植反应。从而利用PHA刺激淋巴细胞转化试验一项非常特异性体外免疫学检测指标，在一定程度上可作为刺激原，因此一般称为PHA淋巴细胞转化试验。 PHA淋转试验有形态计数法和同位素计数法两种，前者测定转化的淋巴母细胞百分率，后者测定放射性同位素标记的DNA前身掺入细胞合成DNA的量。 形态计数法的优点是不需要特殊设备，便于一般实验室采用，但判读结果主观因素影响较大，而且有相当数量的中等大小的淋巴细胞难于分类。此外，在培养过程中单核细胞相对增大，形成似转化的淋巴细胞，容易造成误计。加上此法的测定效率低，重现性较差，有被同位素掺入法取代的趋向，但要了解被激活淋巴细胞的比例和形态改变，则仍需应用形态观察法。 淋巴细胞转化试验的操作方法主要有两种： 1、形态学方法：加分裂原共同培养后，观察形态学变化，计算转化为母细胞的百分数； 2、3H—胸腺嘧啶核苷掺入法：加分裂原共同培养结束前一定时间，加3H标记的胸腺嘧啶核苷，培养后测定镊入细胞内的放射性物质的相对数量，以间接了发转化程度。 形态学方法比较简单易行，不需特殊设备，但重复性和客观性较差；3H掺入法结果客观，准确性好，重复性好，但需要一定设备条件。 PHA淋转试验形态学检查法 一、目的： 1、了解本技术的原理。 2、掌握操作方法。 3、学会分辨几类细胞形态学上的特点。 二、原理： 将人外周血液或分离的白细胞和PHA混合进行体外培养数日后取培养细胞作涂片染色镜检，可见大部分淋巴细胞转化为体积较大的淋巴母细胞，细胞核内生成核仁，并有部分细胞发生分裂现象。由于PHA只激发T淋巴细胞转化，为此计数200个淋巴细胞，可计算出转化细胞的百分离，即得淋巴细胞转化率（简称转化率）。 在正常情况下，PHA淋巴细胞转化率为60-80%，50-60%则偏低，50%下则降低。 三、试验材料： 1、PHA溶液：PHA有粗制品两种。粗制品是含多糖的蛋白质成分，各为PHA-M。精制品为纯蛋白成分，名为PHA—P。国内虽有少数精制的PHA产品，但仍有待试剂标准化。 目前国内在临床检验中作淋转试验所用PHA一般均为粗制品，没有质量标准。原料来源不同，制备条件差异均可影响产品的活力。即使属于同一单位供应，各批产品的活力亦不相同。虽可参照说明书而决定其用量，按下述正式试验方法检测同一标本。如PHA加入量过多，对细胞有毒性；加入量少，不足以刺激淋巴细胞转化，一般最适浓度为50-200Ug/mL。 PHA粗制品亦可按下法自制：将广东红花云豆（Phaseolus Vulgaris）研磨成粉末，取10g粉末加生理盐水100ml，放置4℃冰箱浸泡48小时，每隔数小时稍加搅拌。取出后用滤纸过滤或在4℃离心（2，500转/分）30分钟。取滤液或上清液加生理盐水补足至100ml，继而经细菌滤过滤，无菌分装小瓶，冰冻保存，至少可用半年。如保存时期过长，需再行滴定活力。临用前加10倍生理盐水配成1%浓度。 效价（力）测定：取10支小试管，用生理盐水将植物血凝素（PHA）做倍