亚麻木酚素对糖尿病小鼠肾脏保护作用及机制.docVIP

亚麻木酚素对糖尿病小鼠肾脏保护作用及机制(1.淮安市第二人民医院内分泌科,江苏 淮安 223002; 2.南京医科大学第二附属医院营养科,江苏 南京 210011; 3.江苏省疾病预防控制中心,江苏 南京 210009) 摘 要:目的:观察亚麻木酚素提取物(FLE)对糖尿病小鼠早期肾损伤的影响并探讨其作用机制。方法:雄性ICR小鼠分6组:正常对照组,糖尿病模型对照组,糖尿病模型亚麻木酚素提取物[600mg/(kg#8226;d)、1.2g/(kg#8226;d)、3.6g/(kg#8226;d)]治疗组,糖尿病小鼠盐酸二甲双胍[100mg/( kg#8226;d)]治疗组。连续灌胃8周,实验结束后比较各组体重、肾重、肾重/体重、24h尿白蛋白排泄率、肾组织MDA含量及肾组织SOD、GSH-PX活性,HE染色分析肾小球病理形态学改变,综合评价亚麻木酚素提取物对肾脏的保护作用。结果:与糖尿病模型对照组比较,亚麻木酚素提取物中、高剂量组的肾重、24h尿白蛋白排泄率显著降低(P 适应性喂养1星期后,禁食6h,按170mg/kg腹腔内一次性注射链脲佐菌素(STZ,Sigma公司)。STZ临用前用枸橼酸钠缓冲液(0.1mol/L,pH4.5)配制,使用前过微孔滤膜除菌。同时设立正常对照组(NC组,?n?=12),注射等量的枸橼酸钠缓冲液。正常饮食,不使用胰岛素及其它降糖药物。72h后测血糖高于16.7mmol/L,则造模成功[3]。 1.2 动物分组及给药? 造模成功后按血糖随机分为5组,每组12只。糖尿病对照组(DC组)、二甲双胍治疗组〔D+MEF组(100mg/kg,昆山双鹤药业有限公司,批号:0501231)〕、亚麻木酚素提取物治疗高、中、低剂量组〔D+HFLE组、D+MFLE组、D+LFLE组,由本试验室制备[4],开环异落叶松脂素(SECO)含量为301mg/g,剂量分别为0.6、1.2、3.6g/kg〕。各治疗组用药均在临用前用双蒸水配成混悬液,DC组及NC组则灌予等量双蒸水。灌胃体积均为0.1mL/10g体重。每组灌药1次/天,连续给药8周。 1.3 标本收集 ? 各组小鼠喂养8周后,于代谢笼中收集24h尿液,于-30℃冰箱中保存待用于测定尿微量白蛋白。麻醉处死后取双肾,去除包膜,用冰冷的生理盐水洗去表面污物后称重,左肾用10%福尔马林溶液固定,待作病理检查。其余标本取0.2g左右组织用生理盐水制成5%的组织匀浆,3500r/min离心15min后取适量上清液备测。 1.4 观察指标及方法 1.4.1一般情况 包括精神状态、饮食、毛色、尿量及体重增长。 1.4.2 尿微量白蛋白排泄率采用胶体金双抗夹心法检测。 1.4.3 肾重(KW) 体重(BW) 肾脏脏器系数(KW/BW)体重由电子秤测量,肾重由天平测量。根据公式肾脏脏器系数=双侧肾重/体重×100%计算。 1.4.4 肾脏组织丙二醛(MDA) 超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,按照试剂盒说明书取肾脏组织匀浆测定,肾脏组织蛋白定量用考马斯亮兰法。 1.4.5 肾脏组织病理学检查 肾脏组织经10%的福尔马林固定约4h后,经过PBS缓冲液漂洗、逐级酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡与包埋、切片和苏木素-伊红染色(HE染色)后,进行光镜下病理观察分析。 1.5 统计方法? 采用SPSS 12.0统计软件对数据进行分析。数据以±s表示,均数间比较采用方差分析,两两比较时,方差齐性时用LSD检验。方差不齐时用Dunnett T3检验。配对资料采用配对?t?检验。P0.05);8周后,模型对照组及FLE各剂量组血糖继续升高,与治疗前比较无差异性(P0.05),但二甲双胍治疗组较试验前显著降低(P0.05)。 表2 FLE对糖尿病小鼠肾脏重量 肾脏脏器系数及尿微量白蛋白排泄率的影响(±s) 组别?n?肾脏重量(g)肾脏脏器系数(%)尿微量白蛋白排泄率(μg/min) NC120.66±0.101.59±0.146.08±1.63 DC120.73±0.112.34±0.15??22.22±3.07? D+LFLE120.64±0.09?#2.20±0.23??21.82±3.00? D+MFLE120.65±0.07?#2.08±0.23?#17.28±3.12?# D+HFLE120.58±0.08?#1.95±0.18?#16.07±2.20?# D+MEF120.61±0.09#2.22±0.28?22.06±2.09?? 注:与正常对照组(NC组)比较,??