MMP-1在人牙周膜成纤维细胞中表达.docVIP

MMP-1在人牙周膜成纤维细胞中表达[摘要]目的:在基因和蛋白水平检测体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)金属基质蛋白酶-1(MMP-1)的表达情况。方法:①收集4～6代体外培养的人PDL细胞,使用PCR方法检测细胞内MMP-1的基因表达;②取细胞外液用Western blot方法检测MMP-1蛋白表达。结果:PCR结果显示MMP-1在PDL中基因水平上有表达,而Western blot结果在蛋白水平上也证明了MMP-1在PDL中有表达,结论:体外培养的PDL具有MMP-1的功能。 [关键词]人牙周膜成纤维细胞;MMP-1;Western blot;PCR [中图分类号]R783[文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2010)03-0372-02 Expression of MMP-1 in human periodontal ligament fibroblasts LIU Xin-wei1,CAO Jun1,LI Zhi-dong2,WANG Yuan2,LIU Qi1 ,ZHANG Zi-chuan1;XU Jing3 (1.Department of Orthodontics,College of Stomatology,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi,China;2.Department of Microbiology,Fourth Military Medical University;3.Xi?an Second Hospital,Xi?an Stomatology Hospital) Abstract:ObjectiveTo detect matrix metalloproteinase -1(MMP-1)gene expression level and protein level produced by human periodontal ligament fibroblasts (HPDLF) cultured in vitro without stimulation. Methods①To collect human PDL cells cultured in vitro and detect gene expression of MMP-1 using PCR;②To detect protein expression of MMP-1 in the extracellular fluid using Western blot. ResultsPCR has proved the gene of MMP-1 expresses in the PDL,while the Western blot has showed the protein level of MMP-1 also expressed in the PDL. Conclusion MMP-1can be produced by PDL cultured in vitro without stimulation. Key words:HPDLF;MMP-1;Western blot;PCR 基质金属蛋白酶(matrix metallop roteinases,MMPs)是一组含Zn2+的能够降解细胞外基质的蛋白酶家族,是细胞外基质降解的关键酶。生物体内的很多生理、病理改建都与这种物质相关,如MMP-1等能溶解牙骨质中的非钙化有机质,与牙根吸收的发生机制相关。研究拟用Western blot和PCR方法在蛋白和基因水平分别研究体外培养的PDL在无干涉的情况下分泌MMP-1的情况,以确定在正常生长状态下,PDL是否有分泌表达MMP-1的功能,从而有助于分析生理状态下组织改建所需的MMP-1的细胞来源,以及分析PDL在这种改建中所起的作用。同时本研究还有助于明确PDL是否可以作为MMP-1的物质来源细胞,研究其调控表达机制,从而分析牙根吸收等病理活动的发生机制。 1材料和方法 1.省略公司);兔抗二抗;离心机;多功能电泳检测仪;转膜仪。 1.2 实验方法 1.2.1 HPDLF的体外培养:收集12～18岁患者正畸拔除的健康前磨牙,无菌条件下刮取牙根中1/3处牙周膜组织,组织块法培养原代牙周膜细胞,培养的细胞经SABC免疫细胞化学检测呈抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,表明细胞来源于中胚层,证实为牙周膜成纤维细胞。取其第4～6代细胞进行实验。弃培养液,加入0.25%胰酶+0.1%EDTA混合消化液消化细胞,约1min,用含10%小牛血清的DMEM终止。800r/min离心混匀,调整细胞