重组人促卵泡激素rhFSH肽图分析方法研究.docxVIP

中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2010年第31卷第5期333重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究粱成罡，沈舒，杨化新(中国药品生物制品检定所，北京100050)摘要：目的建立重组人促卵泡激素(rh·FSH)的标准肽图分析方法。方法通过起滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh·FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用Ⅳ型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链．经SDS．PAGE验证切糖结果后，用胰蛋白酶水解，酶解所得肽段通过RP—HPLC分析，得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh．FSH制荆富集制备的rh—FSH结构完整，可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肤图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。关键词：重组人促卵泡激素；肽图；质量控制；糖蛋白结构分析中图分类号：R927．1文献标识码：A文章编号：1005—1678(2010)05_0333Ⅲ3Studyonthemethodofthepeptidemappinganalysisofrecombinanthumanfolliclestimulatinghormone(rh-FSH)LIANGCheng-gang，SHENShu，YANGHua-xin(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts，Beijing100050，China)Abstract：PurposeToestablishthemethodofstandardpeptidemappingforrecombinanthumanfol-liclestimulatinghormone(rh-FSH)．MethodsEnrichmentandpreparationoftherh—FSHreferencesam—piebyultrafiltration，dialysisandfreezedrying．Preparingthesamplesolutionaccordingtotheprogramofureadenaturation，dithiothreitol(D1-I)reducingandindoaceticacidalkylation．Theoligosaccharidechainwasremovedfromthemoleculeofrh—FSHbytheN-typeglycosidaseF(PNGaseF)andthentheresultoftreatmentwasassessedbySDS．Thepeptidemapofrh—FSHwasobtainedbytrypsinhydrolysisandRP-HPLCanalysis．ResultsTherh·FSHreferencesamplepreparedfromtherh-FSHpreparationofafor-eignoriginmanufacturebyanenrichmentprocedurewasofintegrityinthemolet’ulestructure．Itisavaila—bhtobeusedasthereferencefortherh—FSHpeptidemappinganalysis．7fhepeptidemapofthesamplefortestingoftherh-FSHwasconformedtothatoftherh·FSHreference．ConclusionThemethoddevel-opedmaybeservedastheroutinemethodinqualitycontrolsfortherh—FSHproduct．Keywords：recombinanthumanfolliclestimulatinghormone(rh—FSH)；peptidemap；qualitycon·trol；glycoproteinstructuralanalysis重组人促卵泡激素(Recombinanthumanfollicle不育¨-2】，目前在我国已上市的产品均为国外原研公stimulatinghormone，rhFSH)是通过重组技术由中国司生产。国内企业生产的rh．FSH药物处于临床研仓鼠卵巢细胞(CHO)表达获得的人促卵泡激素，rh—究阶段。FSH的药物制剂主要用于治疗垂体功能低下的不孕按生物仿制药上市要求，我国企业生产的产品质量标准应不低于国外原研产品，其药物分子结构应与原研产品一致。因此，在质量研究过程中建立收稿日期：2010-05-19科学合理的