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116 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2012, 47 ( 1) : 116 123 腺病毒-阴离子脂质体复合物的制备和体外表征 1, 2 1 1 1 1* 钟志容 , 万 瑜 , 石三军 , 张志荣 , 孙 逊 ( 1. 四川大学华西药学院, 四川 成都 610041; 2. 泸州医学院, 四川 泸州 646000) 摘要: 为了制备腺病毒-阴离子脂质体复合物 (AL-Ad5), 首先利用HEK 293 细胞大量扩增了带有绿色荧光 蛋白报告基因的重组腺病毒, 并以氯化铯两步密度梯度离心法进行纯化, 再通过细胞病变效应 (CPE) 法、壳蛋 白免疫法和定量聚合酶链反应 (Q-PCR) 法分别测定腺病毒滴度。以中心组合设计法优化处方和制备条件, 通过 钙离子融合法制备目标复合物AL-Ad5, 以透射电镜和动态光散射法分别对其外观形态、粒径和zeta 电位进行考 察; 并制备双色荧光标记的复合物, 通过激光共聚焦技术观察该复合物被 MDCK 细胞摄取后的胞内定位, 以考 察阴离子脂质体对腺病毒的包合情况。结果表明, 目标复合物分布均匀, 粒径和zeta 电位分别为 (2 11 ± 10) nm 和 ( 41.2 ± 2.2) mV 。激光共聚焦实验结果表明, 红色荧光标记的腺病毒和绿色荧光标记的脂质体在MDCK 细 胞内的定位一致。由此说明, 阴离子脂质体能够较好地包裹腺病毒以形成腺病毒-阴离子脂质体复合物。 关键词: 腺病毒; 阴离子脂质体; 中心组合设计; 钙离子融合法; 激光共聚焦; 壳蛋白免疫染色; 定量聚合 酶链反应 中图分类号: R943 文献标识码:A 文章编号: 05 13-4870 (2012) 01-0116-08 The complexes of adenovirus and anionic liposomes: preparation and in vitro characterization 1, 2 1 1 1 1* ZHONG Zhi-rong , WAN Yu , SHI San-jun , ZHANG Zhi-rong , SUN Xun (1. Western School of Pharmacy, Sichuan University, Chengdu 610041, China; 2. Luzhou M edical College, Luzhou 646000, China) Abstract: This study is to report the preparation of complexes of Ad5 and anionic liposomes (AL-Ad5), the amplificati