02-4SEC-MALS数据处理-AstraV.docxVIP

SEC-MALS 模式数据处理 (Astra V)本节主要介绍了如何以标样（BSA 或 30 kDa PS）确定HPLC 系统中光散射参数：采集完数据的Basic Collection 窗口界面：数据处理内容如下:设定 baselines选择用于归一化的峰Normalization（归一化）：样品必须具有各向同性特征（rms radius 10 nm）；Alignment （检测器间延迟体积）：样品必须具有单分散性（monodisperse），即Mw/Mn 1.05；Band Broadening（宽峰校正）：样品必须具有单分散性；调整peak所选区域；确定摩尔质量（molar mass）完成以上步骤，可将此结果Save As Template用于其它样品的测定。Template中的Configuration包含了Instruments、Normalization、 Alignment、 Band Broadening等参数值；若Save As Template操作前包含baseline、peaks等信息，则测定其它样品时将包含这些参数信息。1. 设定 Baselines:再次点击Run，在弹出的对话框中将提示，其内容含意：请设定Baselines。设定90° detector的baseline（HELEOS: detector 11，TREOS: detector 2）。点击Autobaseline为其它角度以及RI、UV设定baseline 。设定完成后查看RI、UV的是否合适；若不合适，调整baseline，直至水平。点击ok保存设置。提示: Despiking 程序默认值为Normal，其作用为平滑曲线，消除某些杂点。其等级为：None、Normal、 Heavy。点击OK保存设置。软件自动将窗口转换至Peaks 程序。2. 选择用于归一化（Normalization）的峰:在Peaks程序界面，将鼠标移至峰靠左（靠上部）三分之一处，按住鼠标左键不放，并拖至峰靠右（靠上部）三分之一处。松开鼠标左键，完成峰区域选择操作（HELEOS: detector 11, TREOS: detector 2）。点击OK保存设置。3. Normalization:右击Configuration，选择Normalization：此时，转至Normalization窗口选择用于归一化的峰编号（Peak Name，此处为Peak 1）；输入Radius(BSA: 3.5 nm)。提示：对于未知样品，只要其具有各向同性特征，则可以估算样品半径或输入零。点击Normalize。除90° detector 和QELS detector 外，其它数值将不等于1。当同时打开两个数据文件时，点击Import，可实现将另一数据的归一化系数导入该数据中。HELEOS：由于在流通池池壁或溶剂界面的折射现象，Detector 1 仅在单机模式（光散射小瓶测定）时可以使用；Detector 2 在水相体系下不可用；因而，其归一化系数为1。此外，若Detector 12被QELS 光纤替代，则对应归一化系数也为1。点击OK保存设置。4. Alignment:右击Configuration，选择Alignment。软件转至Determine Interdetector Delay窗口。按住ctrl键，框选 BSA 单体峰进行放大操作；然后选择峰区域，如图所示。点击determine delays软件将自动对齐LS、UV、RI信号。从dRI 信号明显看出峰宽效应的存在。该效应的修正通过Band Broadening 程序实现。点击OK保存并关闭Determine Interdetector Delay窗口。5. Band Broadening:右击Configuration，选择Band Broadening。软件转至Determine Band Broadening窗口。峰起始点选择半峰高处，结束点必须包含基线，如图所示。软件将自动选择参考仪器。点击Perform Fit。宽峰修正后图形如图所示：点击Instrument Details前“+”，Instrumental Terms~1.0 ；而Mixing Terms（UV / LS detector）~ 60。点击OK保存并关闭Determine Band Broadening窗口。6. 调整 peak所选区域，确定摩尔质量（molar mass）:双击Peaks，调整所选peak范围：点击OK保存并关闭Define Peaks 窗口。打开Mass and Radius from LS窗口。在Results Graph（Debye Plot）中，所有的点应在拟合线附近。对于那些偏离较远的点，可以删